一、概念

胎牛血清是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中的添加劑，它時(shí)維持細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝穩(wěn)態(tài)方面的關(guān)鍵者。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞需要在富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子、激素和其他成分的培養(yǎng)基下來(lái)生長(zhǎng)和繁殖。

二、來(lái)源

 胎牛血清是通過(guò)母牛刨腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采血獲得的新鮮胎牛全血，經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白成分的淡黃色透明上清液體，后經(jīng)生產(chǎn)使用多級(jí)高置流膜過(guò)濾技術(shù)和三級(jí)0.1μm終端微濾方法處理后。常用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

三、功能/作用

1）提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

2）提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3）有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4）是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

5）起酸堿度緩沖液作用。

6）提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害

四、如何避免胎牛血清使用時(shí)出現(xiàn)黑點(diǎn)？

1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

2）培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。

3）培養(yǎng)基保持pH值7.0-7.2。

4）嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

5）掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

五、如何避免胎牛血清中產(chǎn)生沉淀？

1）解凍血清時(shí)，清隨時(shí)將之搖晃均勻。使溫度及成分均一，減少沉淀產(chǎn)生。

2）血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻（小心造成氣泡）使溫度與成分均一。

3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清品質(zhì)。

5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

6）若必須做血清的熱滅活，清遵守56℃，30min的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻，溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物增多。

六、血清中包含絮狀沉淀物是什么？怎么處理？

 沉淀包含的是纖維蛋白和脂蛋白，這屬于正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)，要除去沉淀，需要離心血清（例：400g，1-2min）或者更簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶中（但我們一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)殛惗〞?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾）在大多數(shù)情況下我們輕輕搖動(dòng)陳地啊并加熱至37℃就會(huì)在溶解。綜上所訴使用產(chǎn)品時(shí)搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀就會(huì)消失。

七、有必要做熱滅活嗎？

 在大多數(shù)情況下不需要熱滅活處理，不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量，因?yàn)榻?jīng)過(guò)熱處理的血清沉淀物的行程會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會(huì)發(fā)現(xiàn)有很多的"小黑點(diǎn)“常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中又會(huì)使此沉淀物更加增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

八、為何要進(jìn)行熱滅活？

事實(shí)上，大部分血清都無(wú)需進(jìn)行熱滅活，僅在培養(yǎng)部分特殊細(xì)胞時(shí)進(jìn)行滅活，如在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等特殊細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清，因?yàn)榧訜峥梢詼缁钛a(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

九、血清需要做支原體檢測(cè)嗎？

 支原體污染是世界性問(wèn)題，有報(bào)道指出，支原體輕微污染即可影響200多個(gè)基因的表達(dá)，Nature雜志從2013年起，要求涉及細(xì)胞培養(yǎng)的研究，必須進(jìn)行支原體檢測(cè)。