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讓我們先來看看細胞遭受小黑點入侵后的災難現(xiàn)場。 小黑點之所以這么令人頭痛，是由于它的數(shù)量會隨著培養(yǎng)時間的增加而不斷增加，當數(shù)量多到一定程度的時候，就會對細胞的生長造成一定的影響，嚴重影響科研的進展。在顯微鏡下觀察時往往表現(xiàn)為沒有光澤，體積較小的黑色顆粒。 小編這邊結合自己多年細胞培養(yǎng)的經(jīng)歷和接觸到的客戶案例，跟大家分享下培養(yǎng)細胞過程中碰到過的小黑點。   化學或者物理的強烈刺激（例如胰酶消化時間過長，吹打細胞太過用力等）往往會導致細胞死亡，產(chǎn)生很多的細胞碎片。在顯微鏡下進行觀察時，可以看到很多呈不規(guī)則形態(tài)、沒有光澤的顆粒粘附在細胞培養(yǎng)皿的底部。 建議 狀態(tài)不好的細胞往往貼壁能力較強，因此切勿用移液器進行強力的吹打，從而損害了健康的細胞；另外，控制好胰酶消化的時間，只需保證大部分正常的細胞被消化下來就可以了，然后更換新的細胞培養(yǎng)皿。 體外培養(yǎng)的動物細胞很容易受到培養(yǎng)環(huán)境因素的影響，例如營養(yǎng)成分的改變、氧的供給、毒素、細胞代謝產(chǎn)物的積累、pH、 剪切力、細胞密度及微生物污染等。這些環(huán)境的改變都有可能誘發(fā)細胞的凋亡，從而產(chǎn)生很多分泌的凋亡小體。凋亡小體大多游離在培養(yǎng)基中，但也有一些會通過暴露的核酸彼此之間相互黏連，從而形成一個棕色的凋亡小體團塊，沒有細胞光澤。 建議 細胞培養(yǎng)的過程中一定要控制細胞傳代的時間，不能讓細胞“長過”；不要使用過酸或者過堿的培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)；選用內(nèi)毒素含量較低的血清。 磷酸鈣是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。 建議 經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著增多，對于大多數(shù)的細胞而言是不需要進過高溫滅活處理的。 建議 如果污染的細胞數(shù)量不是很多，建議直接丟棄，或者重新復蘇細胞進行培養(yǎng)。
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