一、概述

真菌可以在多個組織系統(tǒng)引起感染。國外的一個文獻報道顯示，假絲酵母菌在血液、中樞系統(tǒng)、眼、呼吸系統(tǒng)、皮膚和黏膜、全身尿液里均可發(fā)現(xiàn)；新型隱球菌除了假絲酵母所在的所能存在的組織系統(tǒng)外，它還可在骨髓里面；霉菌較常見在后面六種組織系統(tǒng)中存在；雙相型真菌跟假絲酵母菌一樣除骨髓其它組織系統(tǒng)均能存在。

由侵襲性真菌病引起的感染預后較差、死亡率高。

侵襲性真菌病是指真菌侵入人體的組織血液，并在其中生長繁殖，所致組織的損害器官功能障礙炎癥反應的病理改變及病理生理的過程。如侵襲性念珠菌感染的病死率是 10-49% ，侵襲性曲霉菌感染的病死率為 62-85% ，侵襲性鐮刀菌病感染的病死率高達 79-81% 。

臨床顯示早期治療可顯著降低患者的死亡率。

目前臨床培養(yǎng)的真菌，如尿培養(yǎng)或痰培養(yǎng)的真菌，光從培養(yǎng)來說無法分清是定時的還是感染的細菌。據報道， 50% 的念珠菌菌屬癥的病人，血液培養(yǎng)是培養(yǎng)無效， 90% 的曲霉菌病人血液培養(yǎng)培養(yǎng)不出來。傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法不能夠滿足臨床工作的需要，因此就需要增加其它檢測的技術，這些技術在診斷侵襲性真菌病的應用中發(fā)揮著越來越重要的作用。

二、真菌抗原檢測

（一） G 試驗

1 、原理

G 試驗檢測的是真菌的細胞壁成分 ---1,3- β -D- 葡聚糖（ BG ），人體的吞噬細胞吞噬真菌后，能持續(xù)釋放該物質，使血液中含量增高。

定植時 BG 很少釋放入血，因此可有助于鑒別真菌侵襲與定植。

2 、臨床價值

1 ,3- β -D 葡聚糖為真菌細胞壁成分 , 適用于除隱球菌和接合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期診斷，尤其是念珠菌和曲霉菌，但不能確定菌種。

診斷侵襲性真菌感染（如侵襲性念珠菌病、侵襲性曲霉菌病、肺孢子菌肺炎等）的方法之一。

3 、檢測方法

（ 1 ） Fungitec G test

陽性閾值為 20ng/L ；

敏感性 67-100% ；

特異性 84-100% 。

（ 2 ） Glucatell test

陽性閾值為 60ng/L 或 80ng/L ；

敏感性 70-80% ；

特異性 90% 左右。

4 、假陽性

（ 1 ）使用纖維素膜進行血透，標本接觸過紗布或其他含有葡聚糖的材料；

（ 2 ）靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；

（ 3 ）標本中存在脂多糖；

（ 4 ）操作者處理標本時存在污染；

（ 5 ）使用多糖類抗癌藥物；

（ 6 ）放化療造成的黏膜損傷導致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經胃腸道進入血液；

（ 7 ）服用多粘菌素 , 厄他培能 , 頭孢噻肟、吡肟 , 磺胺也會不同程度引起假陽性。

5 、假陰性

（ 1 ）隱球菌具有厚壁包膜，生長緩慢，導致假陰性；

（ 2 ）局灶性曲菌病， BG 很少釋放入血；

（ 3 ）抗真菌藥物的使用。

6 、優(yōu)勢和局限

（ 1 ）優(yōu)勢

①鑒別侵襲性感染與定植；

②不受機體免疫狀態(tài)影響，早于臨床診斷平均 4 天；

③是早期真菌感染的敏感生物標志。

（ 2 ）局限

不能區(qū)分真菌的種類。

（二） GM 試驗

1 、原理

GM 試驗檢測的是半乳甘露聚糖（ glactomannan ， GM ），主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷。

半乳甘露聚糖是廣泛存在于曲霉和青霉細胞壁的一種多糖，菌細胞壁表面菌絲生長時，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原。

檢測法是一種微孔板雙抗體夾心法，采用小鼠單克隆抗體 EBA-2 ，檢測人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。

2 、臨床價值

（ 1 ）曲菌定植時極少釋放入血，因此有助于鑒別侵襲與定植；

（ 2 ） GM 釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度；

（ 3 ）連續(xù)檢測 GM 可作為治療療效的監(jiān)測；

（ 4 ）在造血干細胞移植患者中的診斷敏感性高。

（ 5 ）參考值： I ≥ 0.5 為陽性。

3 、假陽性

（ 1 ）使用使用半合成青霉素尤其是哌拉西林 / 他唑巴坦；

（ 2 ）新生兒和兒童（雙歧桿菌定植、食用乳制品）；

（ 3 ）血液透析；

（ 4 ）自身免疫性肝炎等；

（ 5 ）食用可能含有 GM 的牛奶等高蛋白食物。

4 、假陰性

（ 1 ）釋放入血循環(huán)中的曲霉 GM 并不持續(xù)存在而是會很快清除；

（ 2 ）以前使用了抗真菌藥物；

（ 3 ）病情不嚴重；

（ 4 ）非粒細胞缺乏的患者。

5 、優(yōu)勢和局限

（ 1 ）優(yōu)勢

①鑒別曲霉菌侵襲性感染與定植；

②早于臨床癥狀和影像學異常 1 周；

③ GM 診斷侵襲性曲霉感染的敏感度高于 G 試驗；

④血清中存在時間較短，可作為療效監(jiān)測。

（ 2 ）局限

不能區(qū)分曲霉菌的種類。

臨床顯示，同時測定 G 試驗和 GM 試驗有助于早期診斷侵襲性真菌感染。

關于肺泡灌洗液是不是能做 GM 試驗， 2011 年臨床微生物感染雜志上面報道了一篇文章，是比較肺泡灌洗液 GM 試驗和血清 GM 試驗及 G 試驗對重癥患者肺侵襲性曲霉菌病的診斷的效度。入組 51 例病人， 9 例是侵襲性曲霉菌病， 4 例確診， 5 例臨床診斷， 3 例肺孢子菌肺炎， 1 例混合侵襲性曲霉菌和肺孢子菌的病人，結果發(fā)現(xiàn)在肺孢里面 GM 試驗結果跟血清里面非相接近，也就是說 GM 試驗是可以用肺泡灌洗液來做 GM 試驗。

肺泡灌洗液（ BAL ），是侵襲性肺部真菌感染重要的檢測方法；比血清 GM 試驗具有更高的敏感性；結果的判定尚無定論，界值應該高于血清 GM 試驗標準。

（三）隱球菌莢膜多糖抗原

檢測血清或腦脊液中的隱球菌莢膜多糖抗原。

方法有乳膠凝集（ LA ）、 ELISA 、側向免疫層析等。

（四）念珠菌甘露聚糖檢測

主要用于檢測侵襲性念珠菌病。

標本是血清。由于甘露聚糖從血清中快速清除，因此需重復檢測，一般檢測 1-3 次 / 周，與 G 試驗、 GM 試驗非常接近。一過性的或導管相關性念珠菌血癥的患者，用這個方法檢測時一般為陰性。

三、抗真菌抗體血清學檢測

（一）檢測對象

檢測對象為幾種特殊的雙相真菌：莢膜組織胞漿菌、粗球孢子菌 / 副球孢子菌以及皮炎芽生菌。

目前醫(yī)院內開展相對較少，一般高度懷疑是這幾種雙向真菌引起的感染，才做此試驗。

（二）檢測方法

1 、酶聯(lián)免疫試驗檢測特異性 IgM 和 IgG 抗體及其滴度；

2 、補體結合試驗檢測抗體及其滴度；

3 、免疫擴散試驗檢測特異性抗體。

四、分子生物學檢測技術

（一）核酸擴增檢測技術（如 Real-time PCR 以及 Multiplex PCR ）

目前應用主要是從標本里直接檢測真菌，如可以從血、肺泡關系里面檢測曲霉菌，可以從血液里面檢測念珠菌，可以從肺泡灌洗液肺組織痰里面檢測肺孢子菌，還可以從血液組織里面檢測侵襲性真菌。這些方法的敏感性和特異性各有不同。

（二）非擴增的核酸檢測技術（如 PNA-FISH ）

目前主要是針對于陽性血培養(yǎng)液，原理是使用熒光原位雜交。熒光原位雜交是利用熒光標記的特異核酸肽與細胞內相應的巴基類分子或 2NA 分子進行雜交，通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描下，觀察熒光信號來確定于特異攀登雜交后，被染色的細胞或細胞器的形態(tài)和分布，或是結合熒光攀登的 DNA 區(qū)域或者 2NA 分子的染色體，或其它細胞器類的定位。

核酸肽（ Peptide Nucleic Acid ， PNA ）是一種不帶電荷的 DNA 類似的物質。其主鏈骨架主要是由重復的 N2 氨基乙基甘氨酸一酰胺鍵聯(lián)合聚合而成，或剪輯通過亞甲基連接到 PNA 的分子的主鏈上，所以說 PNA 、 DNA 分子雜交結合力強專業(yè)性高。由于沒有電荷排斥力，它雜交形成的雙螺旋結構的穩(wěn)定性高。因此目前在血液培養(yǎng)白色念珠菌、近平化念珠菌、光滑假絲酵母菌等，它的敏感性達到 99.3% 以上，特異性達到 100% ，但敏感性依賴于標本中的菌量，菌量越多敏感性越高。