侵襲性真菌疾病臨床表現(xiàn)常無(wú)特異性，真菌感染病人大多為發(fā)熱病人，病情易被原發(fā)病掩蓋，造成漏診、誤診而延誤治療，因此，早期診斷和快速檢測(cè)侵襲性真菌疾病的技術(shù)與方法成為了臨床上的迫切需求。

目前臨床對(duì)于侵襲性真菌疾病幾種常規(guī)的診斷方法局限性很多，滿足不了當(dāng)前臨床上的需要，這些常規(guī)方法包括：

（1）組織病理學(xué)診斷方法

組織切片中找到病原真菌被認(rèn)為是確診的“金標(biāo)準(zhǔn)”；有真菌侵襲和相應(yīng)的炎癥反應(yīng)與組織損害或組織標(biāo)本真菌培養(yǎng)陽(yáng)性可確診為真菌感染。但組織病理學(xué)檢查取材需要侵入性操作，病情嚴(yán)重的患者難以耐受，可行性差。其敏感性受到取材的影響，一次取材未必能夠找到真菌成分，且侵襲性真菌疾病可引起各種各樣的組織反應(yīng)，給確診帶來(lái)很大困難。

（2）直接鏡檢和培養(yǎng)

直接鏡檢是真菌學(xué)檢查最經(jīng)典的方法，可以在顯微鏡下直接觀察真菌形態(tài)，具有簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用的優(yōu)點(diǎn)。但直接鏡檢陽(yáng)性率較低，陰性結(jié)果不能排除，且同一菌屬內(nèi)的多種真菌鏡下形態(tài)相似，給菌種鑒定帶來(lái)困難。而培養(yǎng)檢查需要結(jié)合菌落特征、生化試驗(yàn)等進(jìn)行詳細(xì)觀察，培養(yǎng)過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)，有時(shí)需要數(shù)周時(shí)間重復(fù)多次接種才能得出可靠結(jié)果，但敏感性和陽(yáng)性率較低，同時(shí)對(duì)操作人員的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)要求高，不利于早期診斷。

（3）影像學(xué)檢查

動(dòng)態(tài)影像學(xué)檢查對(duì)提示診斷具有重要作用，胸部CT 掃描，特別是高分辨率 CT 的臨床應(yīng)用對(duì)早期診斷價(jià)值較高。但影像學(xué)檢測(cè)特異性較差，接合菌、鐮孢菌、放線菌、奴卡菌、金黃色葡萄球菌等血管侵襲性感染在影像學(xué)上可能與侵襲性曲霉相似，所以影像學(xué)檢查通常只能作為輔助診斷手段。

鑒于以上侵襲性真菌疾病的幾種常規(guī)診斷方法的局限性，現(xiàn)在醫(yī)學(xué)界越來(lái)越多的開(kāi)始采用血清學(xué)的方法進(jìn)行對(duì)侵襲性真菌疾病的診斷。血清學(xué)診斷方法是應(yīng)用免疫和生化方法檢測(cè)血清或其他體液中的真菌細(xì)胞壁和胞質(zhì)成分，即多糖生物標(biāo)記物抗原。目前臨床上最有價(jià)值的診斷方法為1,3-β-D葡聚糖檢測(cè)（G試驗(yàn)）、半乳甘露聚糖檢測(cè)(GM試驗(yàn))、甘露聚糖檢測(cè)（M試驗(yàn)）、莢膜多糖檢測(cè)試驗(yàn)（GXM試驗(yàn)），以及煙曲霉和白色念珠菌IgM/G抗體檢測(cè)試驗(yàn)。其中，G試驗(yàn)（我檢驗(yàn)所已開(kāi)展）和GM試驗(yàn)是美國(guó)FDA和歐洲癌癥研究組織推薦和認(rèn)可的真菌感染早期體外檢測(cè)診斷技術(shù)與方法。

（1） G試驗(yàn)

1,3-β-D葡聚糖檢測(cè)試驗(yàn)簡(jiǎn)稱G試驗(yàn)。葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中，1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細(xì)胞壁上的特有成分，或稱為真菌的分子標(biāo)志物。該試驗(yàn)?zāi)艹醪胶Y查真菌感染，除隱球菌、接合菌屬等無(wú)法檢出，其他真菌感染均可檢出。

（2）GM試驗(yàn)

半乳甘露聚糖（Galactomannan，GM）是曲霉菌胞壁的組成成分，并稱為多糖生物標(biāo)記物抗原?？梢詫z測(cè)血清曲霉GM抗原作為侵襲性曲霉感染的診斷指標(biāo)。國(guó)外市場(chǎng)目前只有法國(guó)Bio-Rad公司的曲霉半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品（PlateliaAspergillus EIA）用來(lái)進(jìn)行侵襲性曲霉感染的早期檢測(cè)診斷。該產(chǎn)品目前沒(méi)有獲得中國(guó)CFDA的產(chǎn)品注冊(cè)證書(shū)。

（3）M試驗(yàn)

念珠菌甘露聚糖（Mannan, M）作為念珠菌感染的標(biāo)志物已被廣泛研究。侵襲性真菌病約50%為念珠菌感染，其中白色念珠菌最為常見(jiàn)，占念珠菌感染比例超過(guò)65%。念珠菌BSI占醫(yī)院獲得BSI第4位，占所有病原菌BSI的10%，其病死率可達(dá)50%。據(jù)報(bào)道，對(duì)侵襲性念珠菌感染，甘露聚糖抗原檢測(cè)比血培養(yǎng)提前8.8±8.5(range 2–23) 天報(bào)陽(yáng)性。而血培養(yǎng)陽(yáng)性率低，耗時(shí)長(zhǎng)，G試驗(yàn)又不能實(shí)現(xiàn)念珠菌的鑒別診斷，所以M試驗(yàn)是對(duì)侵襲性念珠菌感染的檢測(cè)有著十分重要的意義。

（4）真菌抗體檢測(cè)試驗(yàn)

發(fā)生侵襲性真菌感染的病人，在真菌的抗原進(jìn)入血液之后，人體會(huì)產(chǎn)生免疫反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體?？贵w的不同類型代表了感染的不同階段。侵襲性真菌感染伴隨著真菌特異性抗體的產(chǎn)生，真菌定植患者檢測(cè)不到真菌特異性抗體，據(jù)此可區(qū)分感染與定植。因此，真菌抗體的研究已被越來(lái)越多的臨床專家重視。

1999-2010年期間，共有約600篇研究白色念珠菌mannan抗原或anti-mannan抗體的文章，大約22個(gè)實(shí)驗(yàn)室通過(guò)ELISA方法檢測(cè)了念珠菌感染患者血清中mannan抗原或anti-mannan抗體。

關(guān)于煙曲霉抗體檢測(cè)的研究也表明，約64%肺曲霉病患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生煙曲霉IgG抗體，抗體檢測(cè)尤其是ELISA法IgG抗體檢測(cè)對(duì)臨床診斷的確認(rèn)和臨床用藥的評(píng)價(jià)有著十分重要的意義。

（5）GXM試驗(yàn)

隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan, GXM)是隱球菌引起病理變化主要的毒力因子，也是隱球菌感染的特異性標(biāo)記物。近年來(lái)，新型隱球菌感染成為艾滋病患者的重要死因，且呈逐年遞增的趨勢(shì)。目前主要的檢測(cè)方法為印度墨汁染色和培養(yǎng)，但敏感性差，陽(yáng)性檢出率很低，易導(dǎo)致誤診。而莢膜多糖抗原檢測(cè)試驗(yàn)檢測(cè)腦脊液和血清樣本的敏感性可達(dá)到97%和87%，能實(shí)現(xiàn)早期快速診斷。對(duì)艾滋病患者繼發(fā)隱球菌感染的患者的早期診斷和預(yù)后都有重要價(jià)值。

二、各項(xiàng)目的臨床意義：

上述新項(xiàng)目共計(jì)八個(gè)產(chǎn)品，均為國(guó)內(nèi)首例真菌非培養(yǎng)檢測(cè)產(chǎn)品，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)空白，有著很強(qiáng)的技術(shù)創(chuàng)新和應(yīng)用創(chuàng)新，實(shí)現(xiàn)醫(yī)學(xué)真菌領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的重大突破，各項(xiàng)目及其意義分別如下：

1. 1,3-β-D葡聚糖檢測(cè)（G試驗(yàn)）

a. 快速診斷與及時(shí)用藥的有機(jī)結(jié)合。

目前的常規(guī)檢測(cè)所需時(shí)間長(zhǎng)而臨床憑經(jīng)驗(yàn)用藥之間可以借助內(nèi)毒素（LPS）與1-3-β-D葡聚糖快速定量檢測(cè)（一小時(shí)出結(jié)果）實(shí)現(xiàn)方向性診斷、及時(shí)用藥治療。

b. 院內(nèi)感染控制工作可以有效展開(kāi)。

基于院內(nèi)常見(jiàn)菌譜與藥敏調(diào)查，在借助內(nèi)毒素（LPS）與1-3-β-D葡聚糖快速定量檢測(cè)情況下，合理、及時(shí)用藥避免新、特、貴等抗生素的盲目應(yīng)用。從而為快速治療、減少醫(yī)療費(fèi)用，增加社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益提供了一個(gè)好方法。

c. 提升檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)在臨床診療方面的作用，快速參與臨床服務(wù)病人的工作。

2.念珠菌甘露聚糖檢測(cè)（M試驗(yàn)）：

a.念珠菌血培養(yǎng)陽(yáng)性率低，甘露聚糖（Mannan,M）檢測(cè)試驗(yàn)可提高檢測(cè)的敏感性；

b.G試驗(yàn)不能實(shí)現(xiàn)念珠菌抗原鑒別診斷，M試驗(yàn)?zāi)芴岣邫z測(cè)的特異性；

c.可實(shí)現(xiàn)侵襲性念珠菌感染的早期檢測(cè)；

d.可對(duì)抗真菌治療進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)

3.曲霉菌半乳甘露聚糖檢測(cè)（GM試驗(yàn)）：

a.半乳甘露聚糖（Galactomannan,GM）抗原為曲霉菌臨床檢測(cè)的標(biāo)志物；

b.GM 試驗(yàn)陽(yáng)性是診斷侵襲性曲霉菌感染的微生物學(xué)證據(jù)；

c.曲霉菌血培養(yǎng)陽(yáng)性率極低；

d.可實(shí)現(xiàn)侵襲性曲霉菌感染的早期診斷；

e.可實(shí)現(xiàn)對(duì)高危人群曲霉菌感染的監(jiān)測(cè)；

f.可對(duì)抗真菌治療進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)。

4.隱球菌莢膜多糖檢測(cè)：

a.在感染的初期，莢膜多糖抗原就能夠在血清、腦脊液、肺泡灌洗液和尿液中被檢測(cè)到，可作為隱球菌病早期診斷的標(biāo)志物；

b.是隱球菌病確診的依據(jù)；

c.可作為臨床用藥及病情監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。

5.抗體檢測(cè)的臨床意義

a. 鑒別感染和定植

無(wú)菌體液培養(yǎng)陽(yáng)性和臨床疑似感染患者抗體陽(yáng)性率和抗體效價(jià)均較高，而定植者抗體陽(yáng)性率和抗體效價(jià)均較低?？梢越⑦m當(dāng)?shù)目贵w臨界值將感染和定植加以區(qū)分。

b. 侵襲性感染的早期診斷

73%的IC患者至少可以早于血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果2天檢出抗體，最多可早于15天，平均為7天。

c. 與相應(yīng)抗原聯(lián)合檢測(cè)，可提高診斷的準(zhǔn)確性和敏感性。

三、項(xiàng)目開(kāi)展的必要性：

伴隨著抗生素的應(yīng)用，免疫抑制劑與腫瘤、移植等新的治療方法的實(shí)施，真菌感染日益嚴(yán)重威脅人的生命。而出于各種原因，培養(yǎng)及其他檢測(cè)手段結(jié)果慢且不敏感，而臨床需要快速診斷，用藥。此技術(shù)的應(yīng)用使三小時(shí)的快速診斷與鑒別診斷成為可能，為病人的快速治療提供了又一有效手段。其必要性主要體現(xiàn)在：

1. 傳統(tǒng)的無(wú)菌體液培養(yǎng)方法敏感性太低，本七個(gè)項(xiàng)目為ELISA法檢測(cè)真菌抗原抗體，各項(xiàng)目敏感性達(dá)到80%以上，從方法學(xué)上敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)的培養(yǎng)及鏡檢技術(shù)；

2. 傳統(tǒng)培養(yǎng)的方法陽(yáng)性率很低，基于標(biāo)記物檢測(cè)的非培養(yǎng)技術(shù)大大提高了陽(yáng)性檢出率；

3. 真菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致貽誤診斷，該七個(gè)項(xiàng)目能在1.5小時(shí)左右完成，當(dāng)天出報(bào)告，為抗感染治療爭(zhēng)取了寶貴的時(shí)間；

4. 組織活檢取材困難，給患者帶來(lái)極大的痛苦，臨床上可行性差，本項(xiàng)目檢測(cè)樣本類型為血清，取材容易，患者痛苦小，很容易在臨床開(kāi)展和推廣；

5. 傳統(tǒng)的培養(yǎng)、鏡檢、組織活檢等方法報(bào)陽(yáng)性時(shí)，患者已有比較明顯的臨床表現(xiàn)。本項(xiàng)目為早期診斷產(chǎn)品，能在真菌病發(fā)生早期，癥狀不明顯的時(shí)候?qū)崿F(xiàn)檢測(cè)，有利于醫(yī)生及時(shí)采取治療措施，提高患者的存活率。

（本文轉(zhuǎn)自中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)）