錯(cuò)配修復(fù)蛋白免疫組化常見表達(dá)模式

一

正常MMR蛋白表達(dá)

圖1，結(jié)直腸癌：MLH-1、MSH-2、MSH-6和PMS-2均有核表達(dá)(僅顯示MLH-1)。腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)(圖1A)、非腫瘤性大腸上皮(圖1B)和淋巴結(jié)節(jié)的生發(fā)中心(圖1C)，后兩種為陽(yáng)性對(duì)照組織。

MMR蛋白在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)通常比在許多內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞中更強(qiáng)烈——盡管染色強(qiáng)度在不同實(shí)驗(yàn)室甚至不同染色之間也可能存在較大差異。

二

異常MMR蛋白表達(dá)

圖2，結(jié)腸直腸癌：圖2A是HE染色，圖2B和圖2C分別是MLH1及PMS2免疫組化染色。腺癌細(xì)胞MLH1和PMS2的核表達(dá)缺失，MSH2和MSH6正常核表達(dá)。

結(jié)果解釋：該表達(dá)譜與MLH-1失活或該基因內(nèi)存在突變相一致。

MLH-1和PMS-2核表達(dá)缺失是結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜癌中最常見的MMR異常表達(dá)模式。這種情況可能是由于MLH-1失活(更常見)或突變(不常見)造成的。需要轉(zhuǎn)診進(jìn)行臨床遺傳學(xué)評(píng)估。

三

MMR蛋白表達(dá)區(qū)域缺失

圖3，轉(zhuǎn)移性乳腺癌：MLH-1和PMS-2核表達(dá)的區(qū)域缺失（圖3B和3C）。內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照表達(dá)，MSH-2和MSH-6核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：這種模式與MLH-1和PMS-2的克隆缺失相一致，可能是由于MLH-1中存在一個(gè)體細(xì)胞突變。因此，不需要轉(zhuǎn)診進(jìn)行臨床遺傳學(xué)評(píng)估。

四

MMR蛋白的完全和區(qū)

域性缺失

圖4，結(jié)直腸癌：MSH-6核表達(dá)的區(qū)域缺失(圖4D到4F)，整個(gè)腫瘤中MLH-1(圖4B)和PMS-2(圖4G)核表達(dá)缺失，內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照正常表達(dá)，腺癌細(xì)胞中MSH-2正常核表達(dá)。

結(jié)果解釋：在MSH-6免疫組化染色中，腺癌細(xì)胞表達(dá)和不表達(dá)MSH-6區(qū)域中內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照染色都表達(dá)，所以MSH-6異質(zhì)性表達(dá)可能發(fā)生在腫瘤腺體之間或單個(gè)腺體內(nèi)。MSH-6缺失的模式很可能是腫瘤細(xì)胞MSH-6突變的結(jié)果。

圖5，結(jié)直腸癌：MSH-6核表達(dá)缺失（圖5C）以及MSH-2異質(zhì)核表達(dá)（圖5B）。

在MSH-2染色中，腺癌細(xì)胞區(qū)域性不表達(dá)，內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照染色排除了染色過(guò)程中干片導(dǎo)致的不均勻這一可能性。MLH-1和PMS-2在腺癌細(xì)胞中保持核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：盡管這個(gè)染色模式不同尋常，但這種模式表明MSH-2或MSH-6存在突變。因此，建議進(jìn)行臨床遺傳學(xué)評(píng)估。

圖6，結(jié)直腸癌：存在細(xì)胞質(zhì)MSH-2的表達(dá)（圖6B和6C），沒(méi)有顯示核MSH-2或MSH-6(圖6D)的表達(dá)。內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照表達(dá)，證實(shí)了MSH-2和MSH-6染色在技術(shù)上無(wú)缺陷。MLH-1和PMS-2在腺癌細(xì)胞中保持核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：這是一種異常的MSH-2表達(dá)模式，具有與核MSH-2表達(dá)相同的意義。因此，建議推薦進(jìn)行臨床遺傳學(xué)評(píng)估。

圖7，無(wú)柄鋸齒狀病變(SSL)：MLH-1點(diǎn)狀核表達(dá)（圖7B），同時(shí)PMS-2核缺失（圖7C），內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照表達(dá)。MSH-2和MSH-6核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：這是一種異常的表達(dá)模式，具有與MLH-1核表達(dá)完全缺失相同的意義。這種點(diǎn)狀模式并不是特定于SSL組織，也可以在其他組織例如CRC中看到，參見圖11。

五

 MMR蛋白在結(jié)直腸腺

瘤和腺癌中的表達(dá)

圖8，結(jié)腸直腸腺瘤-腺癌：在腺癌細(xì)胞（圖8D）和鄰近的腺瘤細(xì)胞中顯示PMS-2核表達(dá)缺失（圖8B和8C）。不過(guò)，后一種細(xì)胞中PMS-2表達(dá)缺失表現(xiàn)為不均勻的陽(yáng)性表達(dá)，內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照正常表達(dá)。MLH-1、MSH-2和MSH-6的正常核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：這種表達(dá)模式高度提示PMS-2中存在突變。約80%結(jié)直腸腺瘤病例存在林奇綜合征，MMR蛋白IHC染色結(jié)果正好印證了這一比例的病例有MMR蛋白缺失表達(dá)。因此，當(dāng)考慮到林奇綜合征時(shí)，結(jié)直腸腺瘤中MMR蛋白表達(dá)缺失是一個(gè)很有用的工具。不過(guò)要注意的是，即使存在林奇綜合征，在腺瘤中也可能四種MMR蛋白的均保留表達(dá)。因此，建議轉(zhuǎn)診進(jìn)行臨床遺傳學(xué)評(píng)估。

六

皮脂腺腫瘤中MMR

蛋白的表達(dá)

圖9，皮脂腺瘤：MLH-1核表達(dá)缺失（圖9B），PMS-2核表達(dá)也缺失，但MSH-2和MSH-6均核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：這些病變MMR蛋白表達(dá)缺失可能與Lynch綜合征有關(guān)。MMR蛋白在皮脂腺腫瘤中不表達(dá)很常見（15-60%），MMR蛋白IHC對(duì)林奇綜合征的敏感性很高（81-85%）。在大多數(shù)這些病變中，dMMR與潛在的MMR基因突變無(wú)關(guān)，因此MMR蛋白IHC識(shí)別林奇綜合征的特異性相對(duì)較低（48%）。

七

MMR蛋白在其他癌癥中

的表達(dá)

圖10，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤：MSH-2（圖10B）和MSH-6（圖10C）核表達(dá)缺失。內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照表達(dá)（在內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)-圖10B和10C；在非腫瘤神經(jīng)元中-圖10D），MLH-1和PMS-2核表達(dá)（未顯示）。

結(jié)果解釋：這種表達(dá)模式高度提示MSH-2中存在突變。該病例患者5年前因結(jié)腸腺癌行結(jié)腸切除術(shù)，已知患有林奇綜合征。在這種情況下，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤中MSH-2和MSH-6表達(dá)缺失與林奇綜合征引起的腫瘤相一致。如果沒(méi)有已知的林奇綜合征病史和臨床遺傳學(xué)的研究要求，對(duì)該腫瘤可能不會(huì)進(jìn)行MMR蛋白IHC以確定它是否可能是由dMMR引起的。雖然林奇綜合征最常與結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜癌相關(guān)，但越來(lái)越多的其他腫瘤與林奇綜合征相關(guān)。

八

結(jié)直腸鋸齒狀病變中

MMR蛋白的表達(dá)

圖11，SSL：在這些SSL中，MLH-1核表達(dá)缺失（圖11B至11D）。內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照表達(dá)。

結(jié)果解釋：通常這與BRAF突變有關(guān)，由于MLH-1啟動(dòng)子序列的高甲基化-結(jié)直腸癌鋸齒狀通路的特征基因改變，PMS-2表達(dá)也缺失。在SSLs中，MLH-1(和PMS-2)的核表達(dá)(病例1-圖11B和11C)和“最小偏差”發(fā)育不良(病例2-圖11D)的核表達(dá)缺失，通常不發(fā)生在“腺瘤狀”或“鋸齒狀”的發(fā)育不良模式。因此，這些MMR蛋白在IHC上的表達(dá)缺失可以支持SSLs中常規(guī)發(fā)育不良的診斷，但如果沒(méi)有MMR蛋白表達(dá)缺失，則不排除發(fā)育不良增生，需要基于形態(tài)學(xué)的判別。

九

MMR蛋白免疫組化染色

的技術(shù)問(wèn)題

圖12，子宮內(nèi)膜腺癌：任何解剖部位和/或腫瘤類型的組織固定不良往往導(dǎo)致技術(shù)欠佳的MMR蛋白IHC，蘇木精和伊紅染色提示這種情況的發(fā)生（病例1-圖12A；病例2-圖12F）。在這種情況下，IHC染色強(qiáng)度在相鄰區(qū)域/惡性腺體之間存在顯著差異（圖12B），或者在單個(gè)惡性腺體內(nèi)可能出現(xiàn)異質(zhì)性（病例1-圖12C和12D；以及病例2-圖12G）。有時(shí)幾乎沒(méi)有明顯的IHC染色，但弱染色可能為灰色或淺棕色細(xì)胞核(病例1-圖12D)。在這種情況下，一個(gè)有用的線索是沒(méi)有（幾乎或完全）內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照染色。

單個(gè)組織塊中腫瘤和非腫瘤組織區(qū)域之間的固定質(zhì)量差異也可能導(dǎo)致腫瘤內(nèi)dMMR的虛假染色，因?yàn)榱夹越M織中MMR蛋白免疫組化染色通常較強(qiáng)(圖12E)。然而，高倍鏡檢查經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)腫瘤內(nèi)MMR蛋白免疫組化染色較弱和/或不均勻。

結(jié)果解釋：MMR蛋白IHC在這兩種情況中都沒(méi)有顯示出dMMR的證據(jù)。請(qǐng)注意，術(shù)語(yǔ)“染色”已經(jīng)在上面的段落中使用了，而不是“表達(dá)式”。這是因?yàn)樵谶@些例子中，IHC染色（技術(shù)上）是次優(yōu)的，而不是MMR蛋白表達(dá)的性質(zhì)。MMR蛋白IHC的技術(shù)問(wèn)題很常見，特別是當(dāng)存在次優(yōu)的組織固定時(shí)。建議與相應(yīng)的蘇木精和伊紅染色切片進(jìn)行比較，以確保組織塊中存在充分固定和處理良好的腫瘤。在這些情況下，仔細(xì)檢查IHC切片的內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照染色的存在和強(qiáng)度是非常必要的。外部陽(yáng)性對(duì)照可以確認(rèn)與IHC相關(guān)的過(guò)程已經(jīng)以令人滿意的方式發(fā)生。然而，并不排除在病例材料中存在抗原保存問(wèn)題的可能性。

在篩查林奇綜合征時(shí)，識(shí)別dMMR非常重要，同時(shí)在幫助預(yù)測(cè)腫瘤是否可能對(duì)新的免疫療法有反應(yīng)時(shí)，這也越來(lái)越重要。雖然有幾種檢測(cè)dMMR的方法，但MMR蛋白免疫組化被廣泛應(yīng)用。在這種情況下，IHC解釋的原則對(duì)所有腫瘤類型都是共同的。不僅需要評(píng)估MMR在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)，而且在內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞和組織中觀察染色結(jié)果以確保結(jié)果準(zhǔn)確性也尤為重要。

Bateman A C. DNA mismatch repair protein immunohistochemistry – An illustrated guide[J]. Histopathology.