2021年9月4日/醫(yī)麥客新聞 eMedClub News/--腺相關(guān)病毒（AAV）載體是基因治療領(lǐng)域最常使用的病毒載體之一，可將健康的基因拷貝運(yùn)送到患者的細(xì)胞中，其應(yīng)用潛力已經(jīng)得到了大量的驗(yàn)證。

作為遞送基因療法的有力工具，AAV具有許多吸引人的特征，包括無致病性、高效的長期基因表達(dá)、易于基因操作以及免疫反應(yīng)低等特點(diǎn)，令人滿意的一系列特性是其作為基因遞送工具的重要原因。

近年來，兩款A(yù)AV基因療法獲批上市，包括治療眼部疾病的Luxturna和靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的Zolgensma，進(jìn)一步推動(dòng)AAV成為了業(yè)界關(guān)注的焦點(diǎn)，持續(xù)升溫。

目前，國內(nèi)外AAV基因療法的臨床試驗(yàn)達(dá)200多項(xiàng)，在多種適應(yīng)癥上取得了進(jìn)展，包括罕見眼科疾病、先天性耳聾、β地中海貧血癥、血友病、杜氏肌營養(yǎng)不良、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、溶酶體貯積癥等。

國內(nèi)近期也迎來了兩款A(yù)AV體內(nèi)基因治療的監(jiān)管動(dòng)態(tài)：

• 2021年3月，紐福斯宣布AAV基因治療NR082獲得國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）頒發(fā)的注冊(cè)性藥物臨床試驗(yàn)（IND）許可，用于Leber遺傳性視神經(jīng)病變。NR082是國內(nèi)首個(gè)獲得臨床試驗(yàn)許可的眼科體內(nèi)基因治療藥物。

• 2021年8月，信致醫(yī)藥（信念醫(yī)藥全資子公司）自主研發(fā)的BBM-H901注射液，一種用于預(yù)防血友病B成年男性患者出血的AAV基因治療藥物，獲得NMPA的IND批準(zhǔn)。這是國內(nèi)第一個(gè)獲批進(jìn)入注冊(cè)臨床試驗(yàn)的血友病AAV基因治療藥物，也是國內(nèi)第一個(gè)全身給藥的罕見病基因療法。

然而，制造出一種安全有效的AAV療法并不容易。其生產(chǎn)過程具有復(fù)雜性，開發(fā)人員首先生產(chǎn)包含所需DNA序列的AAV，利用細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建載體，然后經(jīng)過提取和純化病毒顆粒。

另外，與AAV開發(fā)相關(guān)的質(zhì)量問題也可能來自方方面面。首先，AAV載體培養(yǎng)過程通常無法產(chǎn)生足夠的病毒滴度。其次，提取到的病毒顆粒可能含有殘留的宿主細(xì)胞成分，例如蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)菌和其他病毒，以及來自血清和動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)。最后，一些AAV衣殼可能不包含預(yù)期的序列，即它們可能是空的，或者包含錯(cuò)誤包裝的宿主細(xì)胞DNA。

所有這些挑戰(zhàn)都會(huì)給患者帶來很大風(fēng)險(xiǎn)，但是有一個(gè)共同點(diǎn)，就是需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制。因此，確保所有AAV批次達(dá)到適當(dāng)?shù)牟《镜味?，并且不含有害雜質(zhì)和污染物，是十分關(guān)鍵的。

? 病毒滴度

只有當(dāng)達(dá)到足夠的病毒滴度，AAV基因治療才能夠有效地發(fā)揮作用。然而，傳統(tǒng)上游工藝產(chǎn)生的病毒滴度，往往低于治療患者所需。為了達(dá)到有效劑量，批次需要濃縮100到10,000倍。

然而，許多已有的濃縮裝置并不是針對(duì)AAV設(shè)計(jì)的，無法將AAV病毒濃縮到如此小的體積。此外，該過程還增加了批次中宿主細(xì)胞污染物的濃度，為污染物的檢測和去除增加了難度。

? 空衣殼

空衣殼不具備治療效果，是可能影響AAV基因治療有效性的主要雜質(zhì)。這些衣殼還會(huì)與完整衣殼競爭結(jié)合受體，空殼率高則使得達(dá)到治療效果需要加大劑量，但這可能會(huì)增加副作用，特別對(duì)于靶向大腦、脊髓等體積較小的組織，將更具有挑戰(zhàn)性。

另外，空衣殼會(huì)帶來不必要的免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。雖然AAV被認(rèn)為是一種免疫原性低的遞送載體，并且AAV衣殼中不含工程化脂質(zhì)體或其他化合物。但衣殼蛋白本身可以引發(fā)先天免疫反應(yīng)，阻礙病毒感染人體細(xì)胞并降低治療效果。

總的來說，AAV在生產(chǎn)工藝上，對(duì)載體生產(chǎn)的純度有很高要求?？找職げ粌H增加了AAV基因治療的所需劑量，還會(huì)導(dǎo)致不必要的副作用，并引起針對(duì)病毒的不必要的免疫反應(yīng)。因此，空殼病毒作為雜質(zhì)需要采用經(jīng)過驗(yàn)證的方法，進(jìn)行有效檢測并最大限度地去除，同時(shí)明確含量的測定。

AAV空殼率的檢測一直是難點(diǎn)，分析型超速離心技術(shù)（AUC）依據(jù)空殼病毒與全病毒顆粒沉降系數(shù)的不同，可以精確測定產(chǎn)物種AAV病毒載體的空殼率，同時(shí)可以檢測中間產(chǎn)物、病毒載體碎片、基因組碎片、病毒聚集體等。AUC是業(yè)內(nèi)公認(rèn)的AAV空殼率檢測 “金標(biāo)準(zhǔn)”。

毛細(xì)管電泳（CE）具有分辨率高、操作自動(dòng)化、樣品量小等優(yōu)點(diǎn)，近年來已成為生物樣品分析中最先進(jìn)的分析方法之一，也已經(jīng)應(yīng)用于了制藥企業(yè)的藥物申報(bào)和質(zhì)控。CE是一類以毛細(xì)管為分離通道，以高壓電場為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品組分之間電泳淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的新型液相分離技術(shù)。

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