2020年，科學(xué)領(lǐng)域迎來新技術(shù)，即基因魔剪，也就是基因編輯。人類不斷探索新治療方法來開發(fā)新藥，基因技術(shù)也就越來受到科學(xué)家的重視。今年兩位女性研究人員因基因編輯工具CRISPR/Cas9，拿下了2020年諾貝爾化學(xué)獎。值得一提的是，CRISPR/Cas9也正應(yīng)用于乙肝新藥開發(fā)。

乙肝在研新藥CRISPR，永久性使cccDNA失活，治愈感染

業(yè)內(nèi)也將基因編輯，稱為基因剪刀，這種技術(shù)能夠精確識別靶細(xì)胞的DNA片段里面的靶點核苷酸序列，運(yùn)用核酸內(nèi)切酶蛋白實現(xiàn)對DNA靶點序列的切割。這種基因剪刀所實現(xiàn)的上述過程，可以達(dá)到對靶細(xì)胞DNA目的基因片段的精確編輯。目前，這種新技術(shù)正運(yùn)用于抗腫瘤、白血病等領(lǐng)域開發(fā)新藥，而CRISPR/Cas基因編輯新技術(shù)，也有望在慢性乙肝新藥研發(fā)方向帶來機(jī)會。

簡單的講，基因編輯策略可能成為乙肝病毒復(fù)制原始模板cccDNA形成抑制劑。它能夠沉默或耗盡感染肝細(xì)胞中的cccDNA庫，是目前慢性乙肝治療的新療法。近年來，靶向突變引起了醫(yī)藥學(xué)界的廣泛興趣。因為這是通過使用序列特異性RNA，引導(dǎo)核酸酶（RGNs）和蛋白質(zhì)作為治療HBV感染的一種手段，通過永久性地使cccDNA失活來治愈HBV感染。

2020年10月1日發(fā)表于《Journal of Clinical Medicine》雜志的一份研究報告，由希臘雅典和卡波迪斯特里安大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)部研究人員主導(dǎo)完成，其中重點介紹了這種基因編輯策略：cccDNA形成抑制劑。在核酸酶（RGNs）家族中，包括鋅指核酸酶（ZFNs）、轉(zhuǎn)錄激活物樣效應(yīng)器核酸酶（TALENs）以及具有CRISPR相關(guān)（Cas）系統(tǒng)的簇狀間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR），所有這些都顯示出抗病毒功效。

希臘研究人員指出，乙肝病毒復(fù)制模板cccDNA是一種穩(wěn)定的非整合小染色體，包裹在轉(zhuǎn)錄活性和非活性染色質(zhì)中。通過設(shè)計核酸酶，可以在HBV基因組中預(yù)定序列上裂解，從而導(dǎo)致預(yù)先確定的突變。雖然突變的cccDNA可以被轉(zhuǎn)錄，但由此產(chǎn)生的突變病毒蛋白不能再參與病毒復(fù)制。因此，乙肝病毒復(fù)制模板cccDNA是核酸酶基因編輯的最佳靶點，因為它具有上位微染色體結(jié)構(gòu)和序列穩(wěn)定性。

在基因編輯領(lǐng)域更具體的應(yīng)用來講，2020年獲得諾內(nèi)爾化學(xué)獎的兩位女性科學(xué)家開發(fā)的CRISPR/Cas9，是對cccDNA的切割和失活以及對肝癌的抑制作用都已經(jīng)被報道。作用機(jī)制上，表觀遺傳修飾，使積極轉(zhuǎn)錄的DNA在不改變核苷酸序列的情況下，轉(zhuǎn)錄為非轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。DNA結(jié)合域引導(dǎo)表觀遺傳效應(yīng)器到cccDNA的預(yù)定序列，以便進(jìn)行靶向修飾。

在組蛋白修飾和cccDNA甲基化，可通過直接影響cccDNA或相對應(yīng)的組蛋白而引起表觀遺傳改變。組蛋白乙酰化或去乙?；?、組蛋白甲基化或去甲基化、cccDNA甲基化和cccDNA小染色體乙?；瘶?gòu)成潛在的表觀遺傳修飾。研究人員指出核心要點，即潛在的HBV-DNA修飾物包括組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶/脫乙酰基酶（HATs/HDACs）、賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs），與病毒因子如HBx和HBcAg發(fā)生了協(xié)同作用。

特別是HBx長期以來被認(rèn)為是cccDNA轉(zhuǎn)錄和病毒復(fù)制所必需的，這種新基因編輯技術(shù)通過降解Smc5/6作為限制因子。在這方面，HBx構(gòu)成了一個合理的靶點，對其的干擾可能會阻止HBx與病毒相關(guān)細(xì)胞相互作用之間的額外相互作用。在以往文獻(xiàn)中，科學(xué)界提出一種新的一級分子cccDNA失穩(wěn)劑，它可以靶向先前存在的乙肝病毒基因組庫。

小番健康結(jié)語：不要小看這種小分子，研究顯示，這種小分子顯示出對血清中乙肝表面抗原、e抗原、HBV-DNA和HBV-RNA水平具有強(qiáng)大和持續(xù)的抑制作用，并且通過循環(huán)DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)降小鼠模型肝臟中cccDNA水平，這種循環(huán)DNA能夠使用類似于人類的cccDNA依賴機(jī)制復(fù)制HBV。2020年諾貝爾化學(xué)獎授予兩位女性科學(xué)家，她們開發(fā)了新基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9。

CRISPR/Cas9，已在2020年歐洲肝臟學(xué)術(shù)年會（EASL 2020）和2020年美國肝臟研究年會（AASLD 2020）前夕向科學(xué)界發(fā)表關(guān)于該領(lǐng)域科研進(jìn)展（2020年10月1日 Journal of Clinical Medicine）（文末附：截至2020年10月1日部分全球慢性乙肝新藥研發(fā)進(jìn)度表，不包括臨床前數(shù)據(jù)。僅包括過去兩年內(nèi)完成的臨床試驗。數(shù)據(jù)來自美國臨床試驗數(shù)據(jù)庫）。