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乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是引發(fā)慢性乙型肝炎的“罪魁禍?zhǔn)住?，易?dǎo)致肝硬化、甚至于肝癌。乙肝病毒一般通過血液、性接觸和母嬰三種途徑傳播，其中血液傳播是最主要的傳播途徑。 雖然預(yù)防性乙肝疫苗、抗病毒治療藥物已經(jīng)上市，但是全球每年仍然有65萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝癌。而作為乙肝大國(guó)，中國(guó)約有9,300萬慢性HBV感染者，其中慢性乙肝患者約2,000萬例。在我國(guó)肝硬化和肝癌患者中，由HBV感染引起的比例分別高達(dá)60%和80%以上。 這主要與疫苗覆蓋率、治療手段有限有關(guān)，現(xiàn)有的治療藥物主要分為兩種：注射干擾素（IFN-α）和口服核苷類似物（NAs），雖然能夠有效抑制病毒，但是存在長(zhǎng)期用藥、病毒耐藥性、易復(fù)發(fā)等問題。 解析HBV的生命周期：對(duì)其步步封鎖，尋找新的清除靶點(diǎn) 乙肝病毒入侵、感染宿主細(xì)胞的過程：最初，乙肝病毒與宿主肝細(xì)胞表面受體NTCP結(jié)合，會(huì)“脫掉蛋白外衣”去除乙肝表面抗原（HBsAg）。剩余的病毒顆粒侵入細(xì)胞，并將病毒松弛狀的雙鏈DNA運(yùn)輸至細(xì)胞核內(nèi)。病毒DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞核，在DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補(bǔ)齊，形成共價(jià)閉合環(huán)狀的超螺旋DNA分子，即cccDNA。前基因組RNA出核逆轉(zhuǎn)錄形成rcDNA，與編碼的外膜蛋白組裝形成新的病毒顆粒。這些新合成的病毒顆粒要么再次進(jìn)入細(xì)胞核補(bǔ)充cccDNA，要么以出芽的方式感染鄰近的正常肝細(xì)胞。
cccDNA是乙肝病毒前基因組RNA（pgRNA）復(fù)制的原始模板，是病毒復(fù)制、感染細(xì)胞的核心。只有清除了細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA，才能徹底消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)，這也是是抗病毒治療的目標(biāo)。 目前的治療手段并不能徹底清除病毒。不少科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)藥企業(yè)正在致力于尋找新的切入點(diǎn)。他們希望，通過整合這些不同的方法能夠提高慢性乙肝病毒持續(xù)感染的治愈率。 1、病毒進(jìn)入抑制劑（Entry Inhibitors） 病毒進(jìn)入抑制劑應(yīng)當(dāng)是阻斷病毒感染的第一道“大門”?？紤]到肝細(xì)胞表面的NTCP是與病毒識(shí)別的受體，且與病毒大分子蛋白的pre-S1結(jié)構(gòu)域存在互作，所以科學(xué)家們紛紛把目光鎖定在NTCP受體上。 動(dòng)物試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，酰化pre-S1多肽能夠抑制HBV感染及肝內(nèi)傳播。此外，另一種抑制劑是環(huán)孢霉素A（cyclosporine A）。它是一款已獲FDA批準(zhǔn)的免疫調(diào)節(jié)劑。環(huán)孢霉素A衍生物可以阻斷pre-S1多肽與NTCP受體互作，從而實(shí)現(xiàn)防止病毒入侵的目標(biāo)。 除了直接靶向NTCP受體，包括白細(xì)胞介素-6、視黃酸受體拮抗劑在內(nèi)的藥物則是通過抑制NTCP表達(dá)阻斷病毒入侵。 但是，即便上述藥物能夠抑制病毒入侵，仍然存在3大問題： 首先，?；痯re-S1能否抑制本已存在肝細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA？一旦pre-S1?；^程終止，HBV病毒勢(shì)必卷土重來。這意味著，它并不能根除病毒DNA。 其次，NTCP受體并一定是HBV與宿主細(xì)胞互作的唯一受體。一旦被證實(shí)還存在其他受體，就意味著靶向NTCP很可能不能完全阻止病毒感染。 最后，NTCP受體蛋白由SLC10A1基因編碼。該基因并非人類細(xì)胞所特有。NTCP的正常生理功能是運(yùn)輸膽汁酸。然而，現(xiàn)有的候選藥物并不能通過抑制膽汁酸運(yùn)輸而阻斷病毒入侵。 不過，科學(xué)家表示，病毒入侵抑制劑可以與其他治療藥物結(jié)合使用，有望增強(qiáng)病毒防御能力。 2、通過CRISPR/Cas9破壞HBV cccDNA cccDNA是乙肝病毒得以猖獗、復(fù)發(fā)、耐藥的根源?？茖W(xué)家希望通過基因編輯技術(shù)破壞病毒的復(fù)制、表達(dá)過程，例如ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9。科學(xué)家選擇最為保守、適用于多種HBV基因型的多切割位點(diǎn)，破壞cccDNA結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性，從而瓦解HBV復(fù)制模板。 雖然這些試驗(yàn)在體內(nèi)、體外都得到了很好的驗(yàn)證，但是它依然存在局限性： 其一，CRISPR/Cas9治療本身存在倫理擔(dān)憂和安全顧慮。例如，Cas9酶存在脫靶隱患，易引發(fā)非目標(biāo)基因組的損傷。所以需要確保CRISPR/Cas9能夠精準(zhǔn)識(shí)別cccDNA，而非宿主基因組。 其二，這種策略可能會(huì)導(dǎo)致抗CRISPR/Cas9的HBV變體。所以，挑選多切割位點(diǎn)很必要，它能夠盡可能降低抗性出現(xiàn)的概率。 其三，CRISPR/Cas9技術(shù)的精髓在于它能夠直接靶向cccDNA，但是已有的研究并沒有比較剪切前、剪切后的cccDNA分子量變化，而是轉(zhuǎn)向檢測(cè)HBsAg、HBV總DNA等指標(biāo)。 其四，這種治療方法依賴于CRISPR/Cas9體系進(jìn)入被感染細(xì)胞的效率。只有大多數(shù)被感染細(xì)胞經(jīng)過CRISPR/Cas9技術(shù)處理，病毒才能夠被控制住。 其五，少量cccDNA存在于微型染色體上?，F(xiàn)在并不確定基因編輯技術(shù)能否靶向這一部分。 3、表觀遺傳學(xué)修飾cccDNA 除了瓦解其結(jié)構(gòu)之外，科學(xué)家希望通過表觀遺傳學(xué)修飾cccDNA使其沉默不表達(dá)，主要方式包括DNA甲基化、組蛋白翻譯后修飾。 已有研究證實(shí)，cccDNA轉(zhuǎn)錄、HBV復(fù)制能夠被干擾素、白介素- 6、X蛋白、組蛋白去乙酰化酶抑制劑、P300抑制劑表觀修飾。但是，圍繞這一方法是否有效的研究一直未成定論，例如組蛋白去乙?；敢种苿┠芊窕謴?fù)HBV復(fù)制仍然需要驗(yàn)證。 事實(shí)上，組蛋白去乙?；敢种苿?huì)影響機(jī)體血小板數(shù)量，且存在激活潛伏期病毒的風(fēng)險(xiǎn)。如果這些未知、隱患被克服后，表觀遺傳學(xué)修飾cccDNA能夠作為抗乙肝病毒的有效策略之一。 4、抗病毒miRNA和 siRNA SiRNAs具有沉默基因表達(dá)的能力。同樣，作為非編碼RNA，miRNAs同樣具有抑制基因表達(dá)的功能。迄今為止，超30種候選siRNA和至少3種miRNA作為候選分子參與各類疾病治療的臨床研究。 幾種基于siRNA的抗HBV藥物正處于臨床試驗(yàn)階段：ARC-520藥物能夠直接靶向不同HBV變體的保守序列，在細(xì)胞、動(dòng)物模型驗(yàn)證中能夠顯著抑制病毒RNA、蛋白和DNA。圍繞ARC-520的臨床Ⅱa期試驗(yàn)結(jié)果都顯示良好。此外，包括miR-130a、miR-125a-5p和miR-199a-5p在內(nèi)的幾種miRNAs被證實(shí)抑制HBV復(fù)制。 5、抑制衣殼包裝 異芳基—二氫嘧啶（HAPs）、phenylpropenamides（PPAs）化合物被證實(shí)能夠干擾病毒衣殼蛋白的形成，相關(guān)試驗(yàn)正處于臨床前/臨床研究中。另一種抑制衣殼組裝藥物是GLS4（HAPs的衍生物BAY41-4109）。這些抑制劑能夠干擾pgRNA衣殼化過程，影響蛋白外殼的穩(wěn)定性或者使得衣殼結(jié)構(gòu)異常。 6、抑制新組裝病毒排出 抑制病毒顆粒分泌，能夠有效阻斷病毒擴(kuò)大感染規(guī)模。利用α-葡萄苷酶抑制劑、亞氨基糖衍生物等化合物抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或者高爾基糖基化過程。這一步能夠有效阻斷表面抗原HBsAg的組裝，從而減少感染性病毒的擴(kuò)散。此外，干擾素誘導(dǎo)因子tetherin被證實(shí)能夠抑制HBV分泌。 7、治療性疫苗 HBV慢性感染會(huì)與體內(nèi)特異的T細(xì)胞達(dá)成協(xié)議，形成免疫耐受（immunologic tolerance）。免疫療法則是針對(duì)耐受性，激活T細(xì)胞攻擊感染HBV病毒細(xì)胞。 科學(xué)家希望通過注射治療性疫苗特異性激活與HBV不應(yīng)答的T細(xì)胞。但是相關(guān)臨床Ⅰ期試驗(yàn)結(jié)果卻不佳，無論是病毒E抗原標(biāo)、血清轉(zhuǎn)化還是病毒DNA指標(biāo)變化都不顯著。 除了激活對(duì)HBV特異不應(yīng)答的T細(xì)胞，如何持續(xù)維持細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的活躍度也很重要。Toll類受體-9（TLR-9）能夠誘導(dǎo)CD11b 髓系細(xì)胞聚集，從而進(jìn)一步促進(jìn)CTL在肝臟的活躍度。 雖然，通過拉米夫定結(jié)合混合有各類HBV ORFs和免疫調(diào)節(jié)劑IL-12的DNA疫苗進(jìn)展治療白種人患者則表現(xiàn)出良好的效果，但是，結(jié)合疫苗和阿德福韋（adefovir）治療韓國(guó)患者卻未能出現(xiàn)預(yù)期效果。 近期，有研究團(tuán)隊(duì)開發(fā)出依賴于乙肝表面抗原-乙型肝炎免疫球蛋白復(fù)合體和明礬佐劑的疫苗，并通過了臨床Ⅲ期試驗(yàn)，但是仍然需要后續(xù)試驗(yàn)以確定其有效性。目前，幾項(xiàng)關(guān)于治療性疫苗的臨床研究正在進(jìn)行中，例如ABX203（臨床Ⅱ/Ⅲ期）、TG1050（臨床Ⅰ期）。 8、PD-1抗體免疫治療 PD-1抗體作為抗癌治療的熱門武器，也可以用于瓦解慢性病毒感染。對(duì)于非活動(dòng)性乙肝病毒攜帶者，抑制PD-1能夠啟動(dòng)對(duì)病毒特異的CD8 T細(xì)胞。 有研究人員結(jié)合三種方法治療感染乙肝病毒（WBV）的土撥鼠：首先用恩替卡韋藥物治療持續(xù)28周， 從12周開始加上治療性疫苗，在24周的時(shí)候注射PD-1抗體。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患病動(dòng)物體內(nèi)的CD8 T細(xì)胞活躍、抗體濃度增加、病毒DNA下降。 備注：文獻(xiàn)原文“Control and Eradication Strategies of Hepatitis B Virus”。 可能感興趣的： 3.5億乙肝患者福音！乙肝新藥TAF 2個(gè)III期臨床均獲得成功 Nature最新發(fā)現(xiàn)：乙肝病毒的絕地反擊！ |
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