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吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心 摘 要 在大型真菌資源調(diào)查中發(fā)現(xiàn)粉褶菌屬4個(gè)中國新記錄種，即布拉赫粉褶菌Entoloma bulakhae O.V. Morozova & Noordel.、北方粉褶菌E. boreale Kokkonen、顯著粉褶菌E. eminens Kokkonen和尤金粉褶菌E. eugenei Noordel. & O.V. Morozova，其中前3種來自吉林省，后1種采自廣西壯族自治區(qū)?；谘芯坎牧线M(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察并采用分子生物學(xué)方法驗(yàn)證，完成了詳盡的形態(tài)學(xué)描述，提供了線條圖和分子信息。粉褶菌屬真菌Entoloma P. Kumm.物種豐富，全世界已報(bào)道1 000余種［1］，其形態(tài)各異，包括小菇型、臍菇型、金錢菌型、口蘑型、側(cè)耳型［2-3］，從北極到熱帶均有分布［4-5］。在我國早期的一些文獻(xiàn)和各地真菌志中記載著粉褶菌屬的研究報(bào)道，周以良等［6］報(bào)道了長白山毒粉褶菌Entoloma sinuatum （Bull.） P. Kumm.，鄧叔群［7］在《中國的真菌》中記錄了6種粉褶菌，戴芳瀾［8］報(bào)道了我國12種粉褶菌。20世紀(jì)80年代以后，我國學(xué)者對(duì)粉褶菌進(jìn)行了系統(tǒng)研究，李茹光［9］報(bào)道了吉林省22種；章衛(wèi)民等［10-12］、應(yīng)建浙等［13］系統(tǒng)報(bào)道了廣東、海南等地的粉褶菌屬物種；李傳華等［14-15］系統(tǒng)地梳理了我國的粉褶菌物種名稱。隨著分子生物學(xué)技術(shù)在分類學(xué)上的應(yīng)用，何曉蘭［16］基于多基因片段，對(duì)中國粉褶菌屬進(jìn)行了系統(tǒng)學(xué)研究。近年來相繼出版的大型真菌著作也記錄了一些粉褶菌，如李玉等［17］在《中國大型菌物資源圖鑒》中記載粉褶菌49種，陳作紅等［18］報(bào)道了6種能夠引起胃腸炎的粉褶菌。王建瑞等［19］、王俊等［20］、何曉蘭等［21-24］相繼記載了粉褶菌屬的新種和新記錄種。筆者在前人基礎(chǔ)上報(bào)道粉褶菌屬中國新記錄種4種，3種采自吉林省，即布拉赫粉褶菌Entoloma bulakhae O.V. Morozova & Noordel.，北方粉褶菌E. boreale Kokkonen，顯著粉褶菌E. eminens Kokkonen；1種采自廣西壯族自治區(qū)，即尤金粉褶菌E. eugenei Noordel. & O.V. Morozova。其中E. eugenei和E. bulakhae分別在2010年［25］和2018年［26］報(bào)道于俄羅斯濱海邊疆區(qū)，E. boreale和E. eminens 在2015年［27］報(bào)道于芬蘭，以上4種在中國均為首次報(bào)道。研究標(biāo)本采于2019年7月至2021年9月，所有標(biāo)本均保存在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物標(biāo)本館（HMJAU）。野外采集時(shí)拍照并記錄采集地、生境、新鮮子實(shí)體的宏觀形態(tài)特征。記錄完成后置于烘干設(shè)備中，55℃烘干，干燥后裝入自封袋，加入適量變色硅膠。取適量干標(biāo)本，采用徒手切片法進(jìn)行顯微觀察，以5%KOH溶液或無菌水為浮載劑，觀察無色組織時(shí)使用1%剛果紅試劑染色，梅氏試劑檢驗(yàn)擔(dān)孢子是否為淀粉質(zhì)。制作臨時(shí)裝片，在光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS CX23）下觀察和測(cè)量擔(dān)孢子、擔(dān)子、囊狀體、菌髓、蓋皮菌絲等結(jié)構(gòu)的形態(tài)特征，繪制線條圖。隨機(jī)測(cè)量20個(gè)成熟擔(dān)孢子，記錄成熟擔(dān)孢子側(cè)面觀長度（測(cè)量尖突至最遠(yuǎn)一角的距離，測(cè)量值不包括尖突）、寬度（測(cè)量與長度垂直最寬處的距離）、擔(dān)孢子角數(shù)，計(jì)算Q值（Q=長/寬）；其他結(jié)構(gòu)測(cè)量20個(gè)［2］。采用試劑盒法（康為世紀(jì)植物基因組提取試劑盒）對(duì)樣本的DNA進(jìn)行提?。焕肞CR擴(kuò)增ITS片段，引物采用ITS1F/ITS4［28］；擴(kuò)增LSU片段，引物采用LROR/LR5［28］。PCR使用25 μL體系：12.5 μL 2×Taq PCR MasterMix，9.5 μL ddH2O，正反向引物各1 μL，1 μL模板。PCR反應(yīng)體系：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸50 s，34個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min，4℃保存。采用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，110 V、60 mA電泳25 min。將合格的樣品送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。所得序列在NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST比對(duì)，從比對(duì)結(jié)果中選取同源性較高的序列（表1），使用BioEdit 7.2.5［29］讀取序列，構(gòu)建數(shù)據(jù)矩陣，MEGA 7.0.26［30］進(jìn)行對(duì)齊，通過RAxML GUI2.0［31］軟件構(gòu)建最大似然法（ML）系統(tǒng)發(fā)育樹，使用FigTree v1.4.4.軟件處理系統(tǒng)發(fā)育樹。表1 用于系統(tǒng)發(fā)育分析的標(biāo)本信息Table 1 Specimens used in phylogenetic analyses Entoloma eugenei Noordel. & O.V. Morozova， Mycotaxon 112：234 （2010）.擔(dān)子體小型。菌蓋直徑2.6~4.0 cm，幼時(shí)半球形后中部凸起，具纖毛狀鱗片，藍(lán)紫色，中央藍(lán)黑色，邊緣內(nèi)卷。菌肉白色，薄。菌褶白色，稀，直生至頂端微凹，具小菌褶，褶幅寬0.2~0.3 cm。菌柄中生，長3~4 cm，粗0.2~0.3 cm，圓柱形，中空，纖維質(zhì)，藍(lán)紫色，向下顏色加深，被纖毛狀小鱗片，基部具白色菌絲體（圖1-a，b）。
圖1 新記錄種子實(shí)體形態(tài)Fig. 1 Basidiomata of the new recordsa， b. 尤金粉褶菌Entoloma eugenei Noordel. & O.V. Morozova；c. 布拉赫粉褶菌Entoloma bulakhae O.V. Morozova & Noordel.；d. 北方粉褶菌Entoloma boreale Kokkonen；e， f. 顯著粉褶菌Entoloma eminens Kokkonen 擔(dān)孢子10.8~12.6 × 7.6~9.4 μm，Q = 1.24~1.50，具5~7角，異徑。擔(dān)子39~51 × 9~12 μm，棍棒狀，具4小梗。褶緣囊狀體22~36 × 6~9 μm，棒狀、頭狀，光滑，薄壁，無色。未見褶側(cè)囊狀體。菌蓋皮層菌絲毛皮型，菌絲直徑6~12 μm，由圓柱狀菌絲構(gòu)成，末端菌絲65~154 × 7~11 μm，具藍(lán)紫色色素，具鎖狀聯(lián)合（圖2）。
圖2 尤金粉褶菌（HMJAU59038）Fig. 2 Entoloma eugenei Noordel. & O.V. Morozovaa. 擔(dān)子體Basidiomata；b. 擔(dān)孢子Basidiospores；c. 擔(dān)子Basidia；d. 緣生囊狀體Cheilocystidia；e. 菌蓋皮層Pileipellis 世界分布：亞洲（俄羅斯遠(yuǎn)東［25］、韓國［32］）。研究標(biāo)本：廣西，賀州市姑婆山，闊葉林地上，2020年7月10日，圖力古爾、牟光福（HMJAU59038）。討論：擔(dān)子體口蘑狀，藍(lán)紫色，菌蓋表面具纖毛狀鱗片。擔(dān)孢子較大。具褶緣囊狀體。蓋皮菌絲末端圓柱形，具藍(lán)紫色色素，具鎖狀聯(lián)合，為該種主要識(shí)別特征。尤金粉褶菌隸屬于Leptonia亞屬sect. Dichroi，該組物種擔(dān)孢子角度明顯［33］。該種與E. kujuense （Hongo） Hongo相似，但后者菌柄密被顆粒狀鱗片，蓋皮菌絲末端細(xì)胞稍短［16］；E. azureosquamulosum T.H. Li & Xiao Lan He與E. eugenei不同點(diǎn)在于，前者擔(dān)孢子?。?.0~10.5 × 6.5~8.0 μm），褶緣囊狀體紡錘形較大（50~100 × 6~13 μm），具柄生囊狀體，無鎖狀聯(lián)合［34］。本種又與歐洲分布的E. dichroum （Pers.） P. Kumm.相似，但后者菌柄亮藍(lán)色，具小鱗片，擔(dān)孢子略?。?.2~11.5 × 6.4~7.7 μm）［33］。目前該種在俄羅斯濱海邊疆區(qū)、韓國有報(bào)道。本研究材料與模式種原始描述相符。通過自測(cè)序列（BLAST比對(duì)結(jié)果與模式種序列相似性99.97%）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹顯示與俄羅斯濱海邊疆區(qū)標(biāo)本序列［25］（KC898438）聚為1支（圖3），且支持率100%，支持形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果。
圖3 基于ITS+LSU序列采用貝葉斯分析法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3 Phylogenetic tree conducted by Bayes inference (BI) analysis based on ITS and LSU sequence dataEntoloma bulakhae O.V. Morozova & Noordel.， in Morozova， Noordeloos， Popov & Alexandrova， Mycological Progress. 17（3）：391（2017） ［2018］.擔(dān)子體小型。菌蓋直徑2.1~3.0 cm，初期扁球形，成熟時(shí)漸平展，中央凹陷，深咖色至褐色，中央黑褐色，表面具褐色小鱗片，中部較密，邊緣無條紋。菌肉薄，白色，無明顯氣味。菌褶乳白色至肉粉色，密，直生或具延生的齒，褶幅0.1~0.3 cm，褶緣鋸齒狀，具小菌褶。菌柄中生，長5.0~6.5 cm，粗0.3~0.4 cm，圓柱形，中空，脆骨質(zhì)，初期灰白色，漸變至紫褐色，向下顏色較深，具小鱗片，基部具白色菌絲體（圖1-c）。擔(dān)孢子，9.3~11.2 × 6.9~8.8 μm，5~7角，Q=1.19~1.44，異徑。擔(dān)子36~44 × 10~14 μm，棒狀，具4小梗。無側(cè)生囊狀體，褶緣囊狀體45~95 × 9~14 μm，棒狀、頭狀，無色，光滑，具鎖狀聯(lián)合。菌蓋皮層菌絲毛皮型，菌絲直徑7.6~12.4 μm，末端細(xì)胞膨大45~69 × 9~20 μm，棍棒狀、圓柱狀，內(nèi)含棕灰色色素，略帶紫色色調(diào)，具鎖狀聯(lián)合（圖4）。
圖4 布拉赫粉褶菌（HMJAU60918）Fig. 4 Entoloma bulakhae O.V. Morozova & Noordela. 擔(dān)子體Basidiomata；b. 擔(dān)孢子Basidiospores；c. 擔(dān)子Basidia；d. 緣生囊狀體Cheilocystidia；e. 菌蓋皮層Pileipellis 世界分布：亞洲（俄羅斯遠(yuǎn)東［26］）。研究標(biāo)本：吉林，蛟河市杉松嶺，蒙古櫟林地上，2019年8月24日，圖力古爾、雒贏（HMJAU60918）。討論：擔(dān)子體臍菇狀，菌蓋、菌柄具深褐色至紫褐色色調(diào)，表面具小鱗片。具褶緣囊狀體，菌蓋皮層菌絲毛皮型，為該種的主要識(shí)別特征。布拉赫粉褶菌在Morozova提出的分類系統(tǒng)中歸為sect. Violaceozonata，該組物種擔(dān)子體具藍(lán)紫色色調(diào)［26］。該種與E. atricolor O.V. Morozova， Noordel.， E.S. Popov & A.V. Alexandrova相似，但后者菌蓋纖維狀，菌褶邊緣黑色，與菌柄相接處尤為明顯，擔(dān)孢子較?。?.2~9.1 × 5.7~6.1 μm）［26］；與歐洲分布的E. violaceozonatum Noordel. & Liiv相比，前者菌褶淡粉色，菌柄具小鱗片，后者菌褶紅棕色，菌柄光滑，褶緣囊狀體較大（60~125 × 5~14 μm）［26］，常見于草地；本材料采自吉林省，在研究中發(fā)現(xiàn)，褶緣囊狀體表面含有少量藍(lán)色色素，并且可在水中消解，其他特征與原始描述相符。通過自測(cè)序列（BLAST比對(duì)結(jié)果與模式種序列相似性99.71%）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹顯示與俄羅斯濱海邊疆區(qū)模式標(biāo)本序列［26］（MF476909）聚為1支（圖3），且支持率達(dá)到100%，支持形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果。Entoloma boreale Kokkonen， Mycological Progress. 14：17 （2015）.擔(dān)子體小型。菌蓋直徑2~6 cm，幼時(shí)中部凸起，后扁平。淺黃褐色至褐色，中央深褐色。濕時(shí)黏，略呈水浸狀，邊緣鈍。菌肉白色，薄。菌褶肉粉色至淺粉色，密，彎生，褶幅寬0.1~0.2 cm。菌柄中生，長5.0~8.5 cm，粗0.3~0.4 cm，圓柱形，中空，纖維質(zhì)，白色至灰白色，上部具粉霜，向下漸粗，基部被白色菌絲（圖1-d）。擔(dān)孢子7.6~9.6 × 6.1~8.0 μm，Q=1.10~1.32，具6~7角，近等徑，無色，厚壁。擔(dān)子29~39 × 9~12 μm，棒狀，無色，薄壁，具4小梗，小梗長達(dá)4 μm。囊狀體未見。菌褶菌髓菌絲規(guī)則型，由寬5~7 μm菌絲構(gòu)成。菌柄皮層菌絲末端細(xì)胞44~82 × 6~11 μm，圓柱狀、棍棒狀、紡錘形、偶見燒瓶形、囊狀，淡黃色。菌蓋皮層菌絲表皮型，寬7~15 μm，菌絲末端細(xì)胞28~101 × 6~22 μm，不規(guī)則圓柱狀、棍棒狀，薄壁，少有厚壁，具淡黃褐色結(jié)痂。所有組織具鎖狀聯(lián)合（圖5）。
圖5 北方粉褶菌（HMJAU59040）Fig. 5 Entoloma boreale Kokkonena. 擔(dān)子體Basidiomata; b. 擔(dān)孢子Basidiospores; c. 擔(dān)子Basidia; d. 菌柄皮層末端細(xì)胞Terminal cells of stipitipellis; e. 菌蓋皮層Pileipellis 世界分布：歐洲（芬蘭［27］、愛沙尼亞［35］、挪威［35］）。研究標(biāo)本：吉林省延邊朝鮮族自治州安圖縣長白山雙目峰，單生于白樺樹下地上，2020年8月21日，圖力古爾、朱力揚(yáng)（HMJAU59040）。討論：擔(dān)子體小型，菌蓋平凸鏡形，中央具鈍凸。菌柄纖維質(zhì)，上部具粉霜，向下漸粗，基部被白色菌絲。擔(dān)孢子大多具6角，無囊狀體。菌蓋皮層菌絲具結(jié)痂。菌柄皮層末端細(xì)胞圓柱狀、棍棒狀、紡錘形。具鎖狀聯(lián)合，為該種主要識(shí)別特征。北方粉褶菌為溫帶分布種，隸屬于Rhodopolia亞屬。該種與E. majaloides P.D. Orton相比，后者菌蓋中央顏色深，菌褶邊緣鋸齒狀，蓋皮菌絲偶見結(jié)痂［27］。Kokkonen在芬蘭首次報(bào)道了該物種［27］。本研究材料與模式標(biāo)本相比，后者生于云杉為主的混交林中，子實(shí)體顏色較深，菌蓋無水浸狀，擔(dān)孢子略小（6.9~8.6 × 5.9~7.1 μm），本研究材料其他特征均與原始描述相符合。自測(cè)序列（BLAST比對(duì)結(jié)果與模式種序列相似性99.61%）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹顯示與模式標(biāo)本序列［27］（LN850624）聚為1支（圖3），且支持率100%，支持形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果。Entoloma eminens Kokkonen， Mycological Progress. 14：22 （2015）.擔(dān)子體大型。菌蓋直徑6.7~10.5 cm，幼時(shí)扁凸鏡形，后不規(guī)則平展，中部微凸，淺棕灰色至土黃色，表面濕時(shí)黏，光滑，水浸狀，邊緣波浪狀，具半透明條紋。菌肉白色，無明顯氣味。菌褶米白色至米黃色，密，直生至頂端微凹，褶幅0.5~0.7 cm，褶緣波浪狀，具小菌褶。菌柄中生，長9.4~11.1 cm，粗1.0~1.4 cm，圓柱形，向下漸粗，中空，肉質(zhì)，白色至灰白色，基部明顯膨大，具白色絨毛（圖1-e，f）。擔(dān)孢子8.2~9.6 × 7.1~8.3 μm，通常5~6角，Q=1.04~1.24，近等徑。擔(dān)子43~55 × 10~15 μm，棍棒狀，具4擔(dān)子小梗。無側(cè)生囊狀體，褶緣囊狀體19~45 × 4~6 μm，圓柱狀，棒狀，頭狀，燒瓶形及不規(guī)則形，薄壁，無色，光滑。菌蓋皮層菌絲毛皮型，菌絲直徑5~11 μm，圓柱形，棍棒狀，內(nèi)含淺黃色色素，具鎖狀聯(lián)合（圖6）。
圖6 顯著粉褶菌（HMJAU59041）Fig. 6 Entoloma eminens Kokkonea. 擔(dān)子體Basidiomata; b. 擔(dān)孢子Basidiospores; c. 擔(dān)子Basidia; d. 菌柄皮層末端細(xì)胞Terminal cells of stipitipellis; e. 菌蓋皮層Pileipellis 研究標(biāo)本：延邊朝鮮族自治州安圖縣長白山科學(xué)院后山，單生于蒙古櫟下地上，2020年7月26日，圖力古爾、葉芊岐（HMJAU59041）。討論：擔(dān)子體大型，口蘑狀。菌蓋水浸狀，淺棕灰色至土黃色，具半透明條紋。菌柄基部膨大。擔(dān)孢子5~6角，具圓柱狀，棒狀，頭狀，燒瓶形及不規(guī)則形褶緣囊狀體，無側(cè)生囊狀體。具鎖狀聯(lián)合，為該種主要識(shí)別特征。顯著粉褶菌隸屬于Rhodopolia亞屬，此前僅在芬蘭和挪威有報(bào)道，該種與E. radicipes相比，后者菌柄脆骨質(zhì)，基部根狀，褶緣囊狀體略大（30~92 × 7.5~14 μm）［27］；與歐洲種相比，本研究材料子實(shí)體菌蓋顏色較淺，褶緣囊狀體略?。?9~45 × 4~6 μm），其他特征與原始描述基本一致?；谧詼y(cè)序列（BLAST比對(duì)結(jié)果與模式種序列相似性100%）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，與芬蘭模式標(biāo)本序列［27］（LN850584）聚集在1支（圖3），且支持率100%，支持形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果。引用本文： 葉芊岐，圖力古爾.粉褶菌屬4個(gè)中國新記錄種［J］.菌物研究，2022，20（2）：87-95. (YE Qianqi,BAU Tolgor.Four Newly Recorded Species of Entoloma from China[J].Journal of Fungal Research,2022,20(02):87-95.) DOI：10.13341/j.jfr.2022.1469 作者簡介：葉芊岐，男，在讀碩士，主要從事大型真菌研究。 通訊作者：圖力古爾：E-mail：junwusuo@126.com 中圖分類號(hào)： Q949.325 文章編號(hào)：1672-3538（2022）02-0087-09 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 收稿日期：2021-10-20 出版日期：2022-06-30
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