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玩轉(zhuǎn)單細胞(17):差異基因分析可以舍棄一些沒必要的基因-例如MT..RPL..

 TS的美夢 2024-11-27

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玩轉(zhuǎn)單細胞往期精彩系列:

玩轉(zhuǎn)單細胞(1):玩轉(zhuǎn)單細胞---提取特定基因表達的細胞群分析(一個小問題)
玩轉(zhuǎn)單細胞(2):Seurat批量做圖修飾
玩轉(zhuǎn)單細胞(3):堆疊柱狀圖添加比例
玩轉(zhuǎn)單細胞(4):單細胞相關(guān)性
玩轉(zhuǎn)單細胞(5):單細胞UMAP圖只標(biāo)記特定細胞群、圈定細胞群及坐標(biāo)軸修改
玩轉(zhuǎn)單細胞(6):單細胞差異基因展示之對角散點圖
玩轉(zhuǎn)單細胞(7):修改Seurat對象基因名稱
玩轉(zhuǎn)單細胞(8): 單細胞3維聚類圖展示
玩轉(zhuǎn)單細胞(9):單細胞Seurat對象數(shù)據(jù)操作
玩轉(zhuǎn)單細胞(10):替換單細胞Seurat對象UMAP坐標(biāo)
玩轉(zhuǎn)單細胞(11):Seurat單細胞基因表達DotPlot圖分面設(shè)置
玩轉(zhuǎn)單細胞(12):單細胞celltype顏色、順序設(shè)置及V5小問題
玩轉(zhuǎn)單細胞(13):Seurat V5單細胞基本可視化
玩轉(zhuǎn)單細胞(14): 玩轉(zhuǎn)單細胞(14): 單細胞分亞群之后分群信息返回原來的seurat對象
玩轉(zhuǎn)單細胞(15):一些簡便的作圖、數(shù)據(jù)運行處理小技巧
玩轉(zhuǎn)單細胞(16):Scanpy單細胞h5ad數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為Seurat對象
請先看這個結(jié)果:
DEGs <- FindMarkers(human_data, ident.1 = "BM",ident.2 = "GM",                     logfc.threshold = 0.25,min.pct = 0.25, group.by = 'group')

這就是這個帖子的問題,可以看到,顯著性top差異基因里面有很多RPL開頭的核糖體基因,這個結(jié)果還好,我之前分析過更夸張的,top基因基本都是MT,RPL等等,不知道的還以為我拿的核糖體測的序列。很顯然,這些基因并不是我們關(guān)注的,但是它就是水零零的出現(xiàn)了,還是P值最小、logFC最大的基因,你說氣人不?

這就是很多小伙伴關(guān)心的一個問題,我可以刪除這些基因嗎?我們在數(shù)據(jù)分析之初,就對線粒體基因和核糖體基因進行了質(zhì)控,質(zhì)控消除了這些基因?qū)毎秩旱挠绊?也有挺多文章直接將這些基因在矩陣中刪除,再進行降維)。但是在做差異分析的時候,又會有這個困擾,所以我們可以將其刪除,再進行分析,也是可以的。當(dāng)然,也要結(jié)合實際情況,不要盲目!
exp_m <- GetAssayData(human_data, layer = 'counts')gene.all <- rownames(exp_m)mt.gene  = grep('^MT-', gene.all, value = TRUE)#線粒體基因ribosome.gene = grep('^RPL|^RPS|^MRPS|^MRPL', gene.all, value = TRUE)#核糖體基因features = setdiff(gene.all, c(mt.gene, ribosome.gene))#去除不需要的基因
不需要改變原來的seurat,只需要在FindMarkers中加入?yún)?shù)features即可。
DEGs <- FindMarkers(human_data, ident.1 = "BM",ident.2 = "GM",                     logfc.threshold = 0.25,min.pct = 0.25, group.by = 'group',                    features = features)

這樣得到的結(jié)果,做富集分析就可以了,否則都得不到有用的通路!

覺得我們分享有些用的,點個贊再走唄!

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