1 介紹

1.1 報告基因已被細胞生物學廣泛使用以研究基因表達及其它與基因表達相關的細胞學事件，例如：受體活性，細胞內(nèi)信號傳導，mRNA 加工，蛋白質(zhì)折疊及蛋白-蛋白相互作用等。
1.2 螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一種以螢光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)活性的試劑盒。
1.3 螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物螢光(bioluminescence)。生物螢光可以通過化學發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀進行測定。原理圖如下圖。
1.4 在所有的化學發(fā)光反應中，它的光產(chǎn)物具有最高的量子效率，因而非常靈敏。另外，在宿主細胞及檢測試劑中均檢測不到背景發(fā)光。本檢測快速，每個樣品只需幾秒鐘。
本試劑盒可以測定100個樣品。

2 螢光素酶檢測系統(tǒng)

每個系統(tǒng)包含足夠100 次標準檢測的試劑。包括：
1 瓶      螢光素酶檢測底物溶液
1 瓶      ATP母液
1 瓶      螢光素酶檢測緩沖液
1 瓶      細胞培養(yǎng)裂解液，5X

3 保存條件

細胞裂解液-20oC保存一年有效， 4 oC三個月有效；螢光素酶檢測試劑-20oC避光保存6個月有效，-80oC避光保存一年有效。

4 使用說明

4.1 裂解細胞：吸掉細胞培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用PBS洗滌一次。將5X的細胞培養(yǎng)裂解液用水稀釋到1X，充分混勻后，足量加入到細胞培養(yǎng)皿中（如400μL/60mm培養(yǎng)皿，900μL /100mm，30μL /96孔板）充分裂解細胞。
4.2 充分裂解后，10,000-15,000g離心3-5分鐘，取上清用于測定。如果在96孔板中裂解細胞可不離心直接轉(zhuǎn)移到96孔板中進行測定。
注：細胞裂解后可立即測定螢光素酶，也可以先凍存，待以后再測定。凍存樣品需融解，并達到室溫后再進行測定。
4.3 融解螢光素酶檢測底物溶液，并達到室溫。
備注：第一次溶解后必須用避光管將其分裝，反復凍融會降低檢測效率。
4.4 按儀器操作說明書開啟化學發(fā)光儀或具有檢測化學發(fā)光功能的多功能酶標儀，將測定間隔設為2秒，測定時間設為5秒。
4.5 每個樣品測定時，取樣品20-100微升(如果樣品量足夠，請加入100微升；如果樣品量不足可以適當減少用量，但同批樣品的使用量宜保持一致)。
4.6 加入100微升（與樣品加入量相同，如加入30μL樣品，則檢測試劑同樣加入30μL）螢光素酶檢測試劑，用槍打勻或用其它適當方式混勻后測定。以報告基因細胞裂解液為空白對照。