一、如何挑選優(yōu)質(zhì)胎牛血清 優(yōu)質(zhì)的胎牛血清是實驗的成功的前提是所有實驗人做細胞培養(yǎng)的共識,如何挑選優(yōu)質(zhì)的胎牛血清,可以從以下幾個方面著手。 1.外觀 好的血清應(yīng)是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象。 2、總蛋白含量 胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。 3、血紅蛋白 標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。 4、pH 國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。 5、微生物 包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性種類病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1μm過濾,大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難完全清除,但對血清質(zhì)量影響不大。病原性種類病毒,特別是BVDV,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進口胎牛血清相對國產(chǎn)血清而言,檢出率不高。 6、免疫球蛋白 國產(chǎn)血清的只是定性檢測,結(jié)果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況,國產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。 7、抗生素含量 此外,抗生素的使用也是要考慮在內(nèi)的。國內(nèi)外的血清,都不對抗生素進行測試(無四環(huán)素胎牛血清除外)。其中,由于國外抗生素使用較為嚴格,用量有限,同時每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以追溯源頭,所以國外胎牛血清不含抗生素或者含量極低。但是國內(nèi)由于抗生素使用普遍,血清中殘留量很高,導致國產(chǎn)血清質(zhì)量很差,不利于細胞培養(yǎng)。 二、如何提升胎牛血清使用效果 胎牛血清是細胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代,它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細胞的培養(yǎng)。因此,如何在使用過程中保護這些因子的活性,達到完美的細胞培養(yǎng)效果,就需要正確地使用胎牛血清。 正確地使用胎牛血清可分為以下四個方面: 1. 正確儲存,避免重復凍融 1) 血清在-20°C凍存。 2) 血清避免重復多次凍融,以免降低因子活性。如一次用不完,應(yīng)進行分裝。 3) 血清和培養(yǎng)基應(yīng)盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”,配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。 4)血清避免在4°C或更高溫度靜置過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。 2. 正確的融化國際上流行的【血清融化三步法】可有效地保存血清中因子的活性,不會產(chǎn)生沉淀,同時能縮短血清融化時間。具體如下: 3. 關(guān)于胎牛血清的滅活 真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體,如果針對補體滅活的話,就不需要。其他情況根據(jù)實驗設(shè)計來決定。 4. 胎牛血清的濃度 胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混合后配成完全培養(yǎng)基。具體合適濃度需要用戶根據(jù)自己的實驗來確定,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費。 |
|
來自: 生物學渣 > 《細胞/試劑/胎牛血清》