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不知不覺幾年下來自己也快畢業(yè)了，感謝丁香園這些年來的幫助。沒有什么可回報的東西，就發(fā)個帖教教新人如何設計引物吧，盡量做到手把手的教，圖文并茂。 引物設計的帖子不少，以前很多戰(zhàn)友會推薦Oligo、PrimerPremier、DNA man等等軟件。這些軟件設計完最后還是要去BLAST比對下，所以我教大家一種易懂實用的在線設計方法，覺得好的話請投個票。 就以人的PTEN基因為例，首先你要找到他的基因序列，如果你要用的是cDNA，就找它的mRNA序列。如果你要做的是DNA，就找DNA的序列。 以cDNA為例，普遍的一種方法是上PUBMED中GENE欄搜索找到cDNA那欄，但PUBMED導出序列不太方便，我介紹個網(wǎng)站 http://asia./index.html 1. 輸入目的基因，進入  2.在左側(cè)欄選擇TRANSCRIPT，選擇后進入  3. 選擇PTEN-001中的TRANSCRIPT進入，點擊左側(cè)cDNA  4. 然后點擊CONFIGURE THIS PAGE進入設置你要顯示的內(nèi)容  5. 除了第一欄SHOWEXONS選擇YES外，其他的都選擇NO，然后取個名字保存SAVE CONFIGURATION AS  6. 然后在左側(cè)欄點擊DOWNLOADVIEW AS RTF可下載你要的cDNA序列，這個文件可以用WORD打開，不同的顏色代表一個外顯子間斷  下載后打開的WORD  7. 然后根據(jù)可以根據(jù)你感興趣的序列設計引物了，比如我在分別在第6和第7外顯子分別設計上下游引物。選取并復制第6和第7外顯子序列  8. 登陸 http://www.ncbi.nlm./tools/primer-blast/，粘貼這段序列，設置好RANGE和PCR產(chǎn)物的大小，然后在下面點擊GET PRIMERS，可以在線設計并比對引物  9.最后選擇一個比較特異性的引物，條帶大小要盡量單一，其他的基因序列盡量不要比對到
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