1.一種利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構建真核基因敲除文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)構建穩(wěn)定表達OCTl蛋白和Cas9蛋白的真核細胞系:將編碼蛋白OCTl和Cas9的DNA序列通過柔性Linker連接，然后克隆至慢病毒載體p0CTl-2A-Cas9-1RES-BSD上；用構建好的載體轉染真核宿主細胞；篩選穩(wěn)定表達OCTl蛋白和Cas9蛋白的真核細胞系；其中，載體p0CTl-2A-Cas9-1RES-BSD 的序列如 SEQ ID N0.1 所示； 2) SgRNA質粒文庫的構建: 1.根據(jù)SgRNA作用位點的DNA序列5，-G-Nx-NGG-3，，其中19 ^ x ^ 22,設計并合成針對上述作用位點的SgRNA單體,針對同一個SgRNA作用位點設計兩個SgRNA單體,其序列分別為正向單體:5’ -ACCG-Nx-3’，反向單體:5’ -AAAC-N’ x_3’，其中N’ x為Nx的反向互補序列，N和N’表不喊基A、T、G或C ; i1.將上述合成的針對同一個sgRNA作用位點的兩個SgRNA單體退火形成具有粘性末端的雙鏈DNA，并將針對所有基因合成的sgRNA單體經退火形成的雙鏈DNA等量混合； ii1.將人U6啟動子連接ccdB序列以及序列5’ -G-Nx-NGG-3’之后，連入PLL3.7載體中替換原載體上的U6啟動子，將構建好的載體與ii中得到的混合物混合，加入BsmBI限制性內切酶和T4連接酶，37°C 5min, 16°C 5min，重復10個循環(huán)； iv.將上述產物轉化至Transl-Tl感受態(tài)細胞中,提取質粒，即構建得到sgRNA質粒文庫； 3)將上述質粒文庫中的質粒與質粒psPAX`2和PMD2.G共轉染至HEK293T細胞中，培養(yǎng)細胞，收獲病毒液； 4)用收獲的病毒液按MOI=0.05接種步驟I)中構建得到的真核細胞系，細胞經培養(yǎng)后，使用流式細胞儀分選帶有綠色熒光的細胞，即獲得真核基因敲除的細胞文庫。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)中所述真核宿主細胞包括但不限于 HEK293T、HT1080、HeLa 細胞。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)中所述柔性Linker序列為p2A:5' -GGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCT-3'。

4.根據(jù)權利要求1-3任一項所述方法構建的真核基因敲除細胞文庫。

5.一種研究基因功能的方法，其特征在于，基于權利要求4所述的細胞文庫，提取細胞的基因組DNA，設計引物，PCR擴增含有sgRNA序列的DNA片段，利用深度測序技術對擴增產物進行測序，分析測序結果，從而確定sgRNA所對應基因的功能。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物序列為正向引物:5’ -TATCTTGTGGAAAGGACGAAACACC-3’，反向引物:5’ -AATACGGTTATCCACGCGGC-3’。