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菌種是食用菌生產(chǎn)最重要的生產(chǎn)資料，菌種質(zhì)量的好壞關系到生產(chǎn)的成功與失敗，優(yōu)良的菌種是栽培成功的基本條件，劣質(zhì)菌種會使食用菌生產(chǎn)輕者減產(chǎn)重者絕收，而菌種生產(chǎn)技術又直接影響和決定著菌種質(zhì)量，近年來，我省食用菌生產(chǎn)發(fā)展迅猛，但菌種生產(chǎn)管理相對滯后，生產(chǎn)技術缺乏統(tǒng)一標準，生產(chǎn)技術本身沒有被生產(chǎn)者正確掌握，因此，菌種質(zhì)量優(yōu)劣不定，成本舉高不下，對食用菌規(guī)?；a(chǎn)造成一定的影響，筆者在多年的食用菌教學、科研與生產(chǎn)中，總結(jié)出的這套食用菌菌種生產(chǎn)實用技術，具有操作容易、設備簡單、高效實用、成功率高、污染率低等特點，解決了大批量生產(chǎn)菌種數(shù)量難滿足、質(zhì)量無保證的難題。 1.母種生產(chǎn)技術 1.1.母種的獲得 母種可選用孢子分離法、組織分離法和基質(zhì)分離法三種方法中的任意一種方法得到，但由于孢子分離法的分離對象是有性孢子，因此變異機率高，這一方面為我們選育優(yōu)良菌株提供了可能，另一方面也為菌種生產(chǎn)帶來一定的風險。所以，菌種科研單位常用此法選育、復壯菌種，而菌種生產(chǎn)單位則不宜采用它獲取母種。用基質(zhì)分離法獲得的菌種生活力很弱，不經(jīng)出菇試驗不能當作母種使用。組織分離法得到的菌種不易發(fā)生變異，能保持原菌種的優(yōu)良特性是菌種生產(chǎn)單位獲得母種的主要方法。 1.1.1種菇（耳）選擇 種菇就是可作分離材料的子實體，被選用的條件是：朵形完整、商品性狀優(yōu)良、生物學性狀典型、無病蟲、無破損、菌蓋尚未展開、孢子還未彈射，成熟度在60-70%之間的幼菇或幼耳。 1.1.2母種培養(yǎng)基的制作 配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蛋白胨5g，酵母膏3g，100萬單位的青霉素100mg，80萬單位的鏈霉素100mg，水1000ml。 作法：將馬鈴薯洗凈、取皮、挖眼、切成約2cm見方的小方塊，投入1000ml水中煮30min，煮時防糊、防溢，過濾取汁；→加入瓊脂繼續(xù)加熱使其溶化，然后加水補充至1000ml；→再加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、青霉素和鏈霉素攪拌溶化至均勻；→趁熱分裝試管和三角瓶并加棉塞包扎；→放入高壓蒸汽滅菌器中，當溫度達到121℃時滅菌lh；→把試管傾成斜面，把三角瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿使其凝固成固體平板培養(yǎng)基；→待用。 1.1.3.組織分離 組織分離法適合于平菇、金針菇、白靈菇、杏孢菇、雞腿菇、雙孢菇等菇類和黑木耳、銀耳等耳類食用菌，其操作方法和過程依次為：把選好的種菇（耳）用清水沖洗；→用無菌紗布或濾紙吸干表面余水；→在無菌室內(nèi)用無菌水沖洗3-5次再用無菌紗布或濾紙吸干表面余水；→用70%的乙醇擦洗菇（耳）表面；→用無菌的手術刀把菇體從菌蓋與菌柄交接處切開；→用無菌的小尖頭鑷子從菇體切口處撕取小米粒大小的菌肉一塊放置在固體平板培養(yǎng)基上，每個平板上放置3-5塊菌肉；→把平板倒置于20-25℃的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)3-5d；→在無菌室內(nèi)按無菌操作要求；用接種針從生長正常，沒有污染的菌落上挑取黃豆粒大小的一塊菌絲放置在試管斜面培養(yǎng)基上；→把試管放在20-25℃的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)8~10d菌絲長滿斜面即得到母種。 1.1.4.母種的擴大繁殖與保藏 在用于擴大繁殖母種的培養(yǎng)基中：加入青霉素和鏈霉素是防止格蘭氏染色陰性菌和陽性菌感染的有效措施；加入一定量的蛋白胨和酵母膏可保證母種健壯生長；但轉(zhuǎn)管次數(shù)不能超過三次，這是保證母種質(zhì)量，防止菌種退化的關鍵。母種轉(zhuǎn)管必須在無菌室中實施無菌操作，轉(zhuǎn)管前首先要對無菌室消毒，消毒的方法和程序是：清掃室內(nèi)、用清水在空氣中噴霧、擦洗桌面地面等；→1‰新吉爾滅擦洗桌面、椅面及墻面等；→點燃克霉凈（用量4-6g/m3）熏蒸，同時打開紫外線燈照射1h即可達到消毒目的。消毒結(jié)束就開始母種轉(zhuǎn)管，一般一支母種一次可擴大成25支母種，轉(zhuǎn)管兩次就可得到600多支，轉(zhuǎn)管后貼好標簽，置于20-25℃的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)8-10d菌絲即可長滿整個斜面，培養(yǎng)過程中勤觀察及時淘汰有污染的試管，把培養(yǎng)好的試管母種及時用于原種生產(chǎn)或放在4℃的冰箱中保藏。 2.原種生產(chǎn) 2.1.原種配方 配方1：高梁80%，木屑13.8%，麥麩1.6%，玉米面1.6%，豆餅粉2%，石膏粉0.5%，石灰0.3%，克菌劑0.1%，增氧劑0.1%，含水量60%。本配方適合雞腿菇、平菇、白靈菇、杏孢菇等草腐菌類原種的生產(chǎn)。具有發(fā)菌快、吃料快、菌絲健壯、污染小、成品率高等特點 制作方法： 先把高梁放在溫度為70-80℃，ph值12-13的石灰水中，浸泡2-3d，泡至種皮發(fā)軟，種胚由白為青，由硬變軟，子粒完全膨脹后撈起，瀝去余水，待用。把木屑、麥麩等輔料按比例稱取，干拌均勻，然后按料：水=1:1.3-1.4的比例加水拌勻，堆悶約24h；之后，取20%輔料與高梁混合，并摻拌均勻，開始裝瓶，先在瓶底裝1cm厚的輔料，輔料上面裝高梁，瓶口處再裝1cm厚的輔料，整平、壓實料面，在料面中央打一直徑2cm，深至瓶底的孔，擦凈瓶口，用兩層報紙一層塑料包扎封口，裝筐滅菌，若用常壓蒸汽滅菌，則溫度達到100℃，維持10h；若用高壓蒸汽滅菌，則溫度達到121℃，維持1h即可達到滅菌目的。滅菌結(jié)束，溫度降到30℃時接菌。 配方2：棉籽殼75%，木屑10%，麥麩10%，紅糖1%，豆餅粉2%，石灰1%，石膏粉1%，含水量60-65%。本配方適合黑木耳等木腐性食用菌原種的生產(chǎn)。 制作方法 根據(jù)所需原料的總量，按配方的比例，準確稱取每一種原料，然后摻拌均勻，并加水使料內(nèi)含水量達到60-65%，拌料時先將石灰、石膏與黃豆粉摻在一起，干拌3-4次，使其混勻，然后把這三者的混合物與麩皮摻在一起，干拌到均勻混合為止，最后再與主料混合干拌到均勻，如果原料混合不均勻就會造成料內(nèi)營養(yǎng)不均勻、ph值不均勻，導致菌絲生長不均勻。當主料和輔料干拌均勻后，再向料內(nèi)加入定量的水濕拌，加水時首先要根據(jù)干料總量計算出加水量（計算方法是料：水=1:1.4-1.5，也就是說在1kg干料中應加水1.4-1.5kg水），然后分次加入、拌勻，不要一次將所有的水加入，因為主料干濕程度不一樣，主料濕一點加入的水就會少于加水總量，如果一次將水加入就會使含水量偏高，攤開晾曬，拖延工作進程。加水后要濕拌3-4次，讓水分在培養(yǎng)料中均勻分布，然后測定含水量，方法是用手握料指縫間有水滴溢出，但懸而不掉為宜。此時含水量恰好是60-65%，含水量調(diào)好后裝袋。由于菌絲生長所需要的全部水分都是由培養(yǎng)料提供的，如果料內(nèi)含水不足就會使菌絲定植困難，生長稀疏無力，如果含水量過大，料內(nèi)水多氣少，木耳菌絲因得不到充足的氧氣停止生長，相反細菌會大量滋生導致培養(yǎng)料腐敗。在測定含水量的同時，還要測定料的酸堿度，方法是取ph值試紙中一條埋在培養(yǎng)料中，用手捏一下料，取出試紙條在比色板上比色，適宜的ph值是7.5-8.5，一般情況下若能按配方比例正確添加石灰，不存在ph值太大或太小的問題。一旦出現(xiàn)ph值過小應噴灑石灰水，過大則應添加培養(yǎng)料。培養(yǎng)料配好后要及時裝袋，滅菌，擱置過久料內(nèi)微生物大量繁殖，導致培養(yǎng)料變酸，影響菌絲生長。袋可用手工裝也可用裝袋機裝。若手工裝袋則一邊裝料一邊用手壓料，壓料時一手提袋沿，一手用四指向下緊貼袋壁向下壓料，邊裝邊壓，分4-5次裝滿全袋，切不可一次裝滿再從上面下壓，如果這樣下部很難裝實，造成上緊下松，不利于菌絲生長。每袋裝料0.9-1.1kg，袋料高度17-18cm，料不可裝的太瓷，料太瓷通氣性不好，菌絲生長緩慢，料也不可裝的太滿，料太滿料面與無棉封蓋之間的空間太小，袋內(nèi)氧氣少，不利于菌絲生長，袋裝好后，按平料面，用木棍（直徑2.5cm）在料中間打一孔到袋底，打孔時木棍向右旋轉(zhuǎn)打入，拔出時左手按住料面右手向右旋轉(zhuǎn)木棍拔出，以防抖松料面?？状蚝煤筇咨项i圈，將高出頸圈部位的袋口翻卷，蓋上無棉封蓋，放入滅菌筐中滅菌，滅菌采用常壓蒸汽滅菌，用舊汽油桶修建蒸汽發(fā)生器，把裝袋的筐摞在一起，筐上罩二層塑料棚膜，下面用繩系牢，春天滅菌為保溫應加蓋棉毯等物，通入蒸汽，當料內(nèi)溫度達到100℃時，維持10小時，?；鸷鬆F鍋1小時即可達到滅菌目的。 2.2.接種 接種就是在無菌條件下把合格的母種接入滅菌后的料袋或瓶中的過程，接種的基本要求是：一要搶溫接種，就是說在培養(yǎng)料的溫度降到30℃時接種，料溫低菌種不易萌發(fā)，定植，菌絲失水干縮，造成接種失敗，料溫高會燙死菌種，二是.要在無菌條件下接種，為了創(chuàng)建一個適宜接種的無菌環(huán)境，應修建4~6m2接種室，接種室應密閉，墻壁、頂棚、地面要平整光滑，易于消毒，沒有房間的農(nóng)戶可用棚膜搭建，只要能密閉即可。接種前要對接種室認真消毒，消毒的程序是：首先濕掃室內(nèi)，清水擦洗桌面，再用0.1%的新吉爾滅擦洗室內(nèi)的每一表面，然后用5%來蘇兒噴霧，用氣霧消毒劑熏蒸，在熏蒸的同時打開紫外線燈照射30min。消毒前要把接種工具、料袋、菌種等物品全部移入接種室消毒結(jié)束后接種，接種要在接種機前或紅外線燈下進行。用接種機接種速度快、成功率高、污染小。接種方法是：把接種機打開工作4分鐘，用酒精棉球擦手、擦接種鉤和瓶口。然后用酒精燈灼烤瓶口，取掉試管棉塞，用接種鉤鉤取蠶豆大小一塊菌種，投入接種穴內(nèi)，之后加蓋。如果用紅外線燈接種，瓶口、袋口都要在燈正下方15cm處，離燈太近會將菌種烤死，離燈太遠超出無菌區(qū)造成感染。其他操作同接種機接種。 2.3.養(yǎng)菌 食用菌是好氣性真菌，菌絲的生長需要新鮮的空氣，但不需要光，也就是說要在黑暗中生長。最適生長溫度22-25℃，在此溫度下生長最快，它在較低溫度下生長速度雖慢，但菌絲健壯有力、潔白。因此養(yǎng)菌就是在通風良好、接近黑暗和適宜的溫度條件下，讓菌絲健壯生長的過程，為了達到這個目的春季養(yǎng)菌必須在室內(nèi)進行，房間保溫性好，易通風換氣，窗戶上掛暗色窗簾遮光，室內(nèi)擺床架，架寬0.8-1m，層距0.4-0.45m，高、長視房間而定，養(yǎng)菌前點燃硫磺使二氧化硫與水汽結(jié)合形成的亞硫酸起殺菌作用，養(yǎng)菌前7-~10天，室溫保持在25-28℃?？諝庀鄬穸?5-60%為宜，當菌絲吃料4-5cm時，應把溫度降低到25℃以下，讓菌絲健壯生長，如果持續(xù)高溫高濕既可引起污染還會使菌絲生長稀疏無力，吐黃水，在養(yǎng)菌后期要加強通風換氣，保持室內(nèi)空氣新鮮，防止菌絲在高溫缺氧條件下生長。養(yǎng)菌期間若出現(xiàn)雜菌，應及時淘汰。 3.栽培種生產(chǎn) 3.1.栽培種配方 配方1：棉籽殼30%，玉米芯40%，木屑10%，麥麩10%，豆餅粉2%，石灰1%，石膏1%，含水量65%。 配方2：棉籽殼93%，玉米面5%，石灰1%，石膏1%，含水量65%。 3.2.制作方法 由于栽培種數(shù)量大，所以原料的處理處理方法與原種制作有不同之處，干拌輔料時選一干凈的地方把各種輔料分層鋪撒，然后攪拌均勻直到看不見任何一種單一原料的顏色為止；之后把輔料均勻的撒在主料上面，注意不要撒花或撒成堆。攪拌均勻。干拌均勻后再把用水總量的2/3均勻的灑在料面上，立即攪拌一次，不要拖延時間，防止水分流失、輔料結(jié)塊，先用鐵锨把主輔料攪和一下，再往拌料機內(nèi)添料攪拌使主輔料均勻。把經(jīng)過攪拌后的原料再次鋪開鋪勻，將剩余的1/3水量噴灑在料面上，立即攪拌到均勻。從外觀上看料的顏色均勻一致，看不見任一種主料或輔料顏色也不見結(jié)塊；從料堆的任何一個地方取樣測試干濕程度基本一致，無干料塊，無干顆粒，同樣，從料堆的任何一個地方檢測PH值基本一致，看不見石灰顆粒。原料拌好后立即建堆發(fā)酵。把原料建成底寬120cm，高60-80cm，上寬60-100cm的長壟型堆，堆上打孔，孔間距20cm，孔深至料底，打孔棒須光滑，抽出時注意不要讓料把孔眼堵住，堆建好后用草簾、彩條布等物覆蓋料堆保持料堆溫度，建堆后24-72小時，料溫達到60℃后維持12小時左右開始翻堆。翻堆的方法是將料堆上下里外的料攪拌均勻翻向一邊，重新建堆。當料內(nèi)溫度再次升到60℃后，再次翻堆，翻堆時應根據(jù)料內(nèi)水分多少適當補水，但不能過量，否則，料內(nèi)水多氣少，發(fā)酵不良；料溫升到60℃后維持12小時必須翻堆，以后24小時翻堆一次；翻堆后的新堆高低寬窄一致；周圍余料收拾干凈，不能把干料混進料堆，發(fā)酵結(jié)束降溫并散發(fā)廢氣后裝袋滅菌，滅菌方法同原種制作。 3.3.接種與培養(yǎng) 接種栽培種可在簡易接菌室內(nèi)進行，首先對接種室進行消毒，方法同原種制作。接種工具是在一直徑25cm的鐵皮水桶底部放置一只1千瓦的電爐，在桶口罩鐵紗網(wǎng)，在桶口上方10-15cm處接種，接種時打開電爐，電爐產(chǎn)生的熱量就會在桶口上方形成無菌區(qū)，由于無菌區(qū)面積大且十分穩(wěn)定，所以工效很高、污染很低，效果非常理想，接種的其他環(huán)節(jié)與原種制作相同，培養(yǎng)方法同原種。栽培種培養(yǎng)好后要及時使用或低溫保存。 |
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