一．細菌的鑒定步驟

1． 鑒定的概念：將一個未知的菌株按其生物學(xué)特性，經(jīng)過與所有已知菌種進行比較后劃歸到一個已知菌種的分析過程。

2． 對待鑒定的菌種要明確已經(jīng)獲得純化培養(yǎng)或者該菌種在血平板上生長良好，有單個菌落可以進行生化試驗。（我們這里一般都是預(yù)先純化培養(yǎng)）

3． 對待鑒定的菌種進行革蘭染色，觀察形態(tài)（G⁺c，G^–b，G^–c，G⁺b），做觸酶，氧化酶實驗，然后按科，屬，種逐步鑒定。要注意對待鑒定的菌種選擇一個合適的鑒定系統(tǒng)，臨床常見細菌的快速簡單的鑒定系統(tǒng)我們都已經(jīng)設(shè)計好，參考鑒定質(zhì)控單。

4． 按鑒定質(zhì)控單的要求填寫好病人姓名，年齡，性別；標(biāo)本類型，標(biāo)本編號，送檢日期等。另外最重要的是要填寫好該菌種的菌落形態(tài)以及有無溶血。

5． 復(fù)習(xí)革蘭染色，觸酶實驗，氧化酶實驗。

⑴．革蘭染色：是細菌鑒定過程中最常用最基本最重要的染色方法。

首先要將待鑒定的細菌涂片，固定（目的：殺死細菌，改變細菌對染料的通透性）。

第一步：以結(jié)晶紫初染（染色液Ⅰ）

第二步：以盧戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）

第三步：用95%乙醇脫色（染色液Ⅲ）

第四步：最后用稀釋復(fù)紅復(fù)染（染色液Ⅳ）

⑵．觸酶實驗(H₂O₂實驗)：

a.原理：具有過氧化氫酶的細菌能催化雙氧水生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。

b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在潔凈的玻片上涂開，滴加3%過氧化氫數(shù)滴，觀察結(jié)果（立即有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性）。要注意不能在血平板上進行實驗，這樣易出現(xiàn)假陽性；另外陳舊菌落要是進行實驗可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；還有不能在接種針或環(huán)上進行實驗。

c.陽性對照用金黃色葡萄球菌，陰性對照用鏈球菌；試劑要避光置4℃冰箱保存。

d.應(yīng)用：絕大多數(shù)含細胞色素的需氧和兼性厭氧細菌觸酶實驗陽性，鏈球菌屬陰性。臨床常見細菌鑒定實驗中我們一般用于區(qū)別葡萄球菌屬（+），微球菌屬（+），鏈球菌屬（－）。

⑶．氧化酶實驗（Kovac實驗）：

a.       原理：氧化酶又稱細胞色素酶，是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。酶并不直接與試劑（1%鹽酸四甲基對苯二胺）起反應(yīng)，而是首先使細胞色素c氧化，然后氧化型細胞色素c使對苯二胺氧化，出現(xiàn)深蘭色反應(yīng)。

b.       方法（濾紙法，菌落法，試劑紙片法）：

一般我們采用濾紙法，取白色潔凈濾紙條，沾取菌落少許，加試劑一滴，陽性者立即呈粉紅色，繼而出現(xiàn)深蘭色。結(jié)果讀取在10秒鐘時為最佳，60秒內(nèi)讀取可靠。本實驗避免接觸含鐵物質(zhì)（假陽性），也不能在含糖培養(yǎng)基上生長的菌落進行實驗（假陰性）。

c.       陽性對照用銅綠假單胞菌，陰性對照用大腸埃希菌。

d.       應(yīng)用：奈瑟氏屬的菌種均陽性，也用于區(qū)別假單胞菌屬和腸桿菌，前者陽性，后者陰性。

 二．葡萄球菌屬的鑒定

  葡萄球菌屬主要的種有金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌。

1． 形態(tài)與染色：葡萄球菌直徑0.5～1.5μm，菌體圓形，呈單個，成雙以及不規(guī)簇狀排列。染色呈紫色，為革蘭陽性球菌。

2． 與鏈球菌的區(qū)別：觸酶實驗為陽性，而鏈球菌陰性；菌體形態(tài)鏈球菌小于葡萄球菌，呈成雙和鏈狀排列的卵圓形的革蘭陽性球菌。

3． 與微球菌的區(qū)別：觸酶實驗同為陽性，但微球菌的菌體呈四聯(lián)狀，要大于葡萄球菌，微球菌葡萄糖氧化發(fā)酵實驗（操作方法同甘露醇OF試驗）為氧化型；而葡萄球菌為發(fā)酵型。另外呋喃唑酮（即痢特靈50μg/片）敏感實驗微球菌為耐藥，而金黃色葡萄球菌為敏感。

4． 葡萄球菌屬的種間鑒定：

⑴．菌落色素與溶血毒素：金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃色，檸檬色或者淡黃色，而其他葡萄球菌則在血平板上菌落大多數(shù)為白色，也有部分為檸檬色或深黃色。

⑵．溶血毒素：金黃色葡萄球菌有α﹑β﹑γ﹑δ溶血毒素，各毒素的區(qū)別是對動物紅細胞的溶血范圍﹑抗原性及溶血時的溫度等。其中以α溶血毒素為主。而其他葡萄球菌大多數(shù)不產(chǎn)生溶血毒素，只有表葡有極少能產(chǎn)生溶血毒素。

⑶．血漿凝固酶實驗：用與區(qū)別金黃色葡萄球菌（陽性），表皮葡萄球菌（陰性），腐生葡萄球菌（陰性）。血漿凝固酶是金葡菌所產(chǎn)生的，有結(jié)合凝固酶和游離凝固酶兩種。血漿凝固酶檢測有兩種方法，為玻片法和試管法，我們一般采用玻片法。

a. 操作方法：挑取少許金黃色葡萄球菌菌落在玻片上與血漿乳化，結(jié)合凝固酶能作用于血漿中的纖維蛋白原，從而在金黃色葡萄球菌表面發(fā)生凝集，所以我們?nèi)庋勰芸匆娔w粒。玻片法主要由結(jié)合凝固酶作用產(chǎn)生；游離凝固酶是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的胞外酶，能與血漿中的血漿凝固反應(yīng)因子（類似凝血酶的一種物質(zhì)）作用，形成復(fù)合物再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而發(fā)生凝集。試管法主要由游離凝固酶作用產(chǎn)生。

b. 注意事項：菌落不能太多，否則會影響結(jié)果觀察；凝固酶陽性要做自凝陰性對照（用生理鹽水代替血漿），只有在陰性對照也不凝集才能認為是真正的陽性，有一部分葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。

⑷．新生霉素敏感實驗：金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌對新生霉素紙片（5μg/片）敏感；而腐生葡萄球菌，微球菌則對之耐藥。抑菌環(huán)直徑>16mm即為新生霉素敏感。

⑸．甘露醇氧化發(fā)酵實驗：

a.操作方法：取兩支甘露醇微量生化管，在微量管內(nèi)接種待檢細菌，然后一支加兩滴石臘密封，另外一支則不加，放37℃孵箱內(nèi)18～24h后觀察結(jié)果。

b.結(jié)果觀察：微量生化管變黃色為陽性，也就是能利用甘露醇。若兩管都變黃色則說明是發(fā)酵型；其中加石蠟管不變色，沒加石蠟管變黃色則為氧化型；如果兩管都不變色則說明該細菌是不利用甘露醇（產(chǎn)堿型）。

c.應(yīng)用：金黃色葡萄球菌在需氧和厭氧的條件下都能利用甘露醇（即兩管都變黃色）；表皮葡萄球菌需氧部分產(chǎn)酸，厭氧條件下不利用甘露醇（即沒加石蠟管有部分會變黃色，加石蠟管不變黃色）；腐生葡萄球菌與表皮葡萄球菌類似。

 三．微球菌屬的種間鑒定

微球菌屬主要的種有易變微球菌，藤黃微球菌，玫瑰微球菌。鑒定生化見下表

       d：不定     S：敏感     R：耐藥

 四．鏈球菌屬

1． 形態(tài)和染色：鏈球菌的直徑為0.5～1.0μm，呈成雙和鏈狀排列的卵圓形革蘭陽性球菌，菌體小于葡萄球菌，無鞭毛，沒有芽胞，但有些菌株會形成莢膜。肺炎鏈球菌呈矛頭狀，寬端相對，尖端向外。

2． 根據(jù)鏈球菌在血平板上溶血現(xiàn)象的不同分為三種：⑴甲型（α-）溶血，即菌落周圍出現(xiàn)較窄的草綠色溶血環(huán)；⑵乙型（β-）溶血，即菌落周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)；⑶丙型（γ-）溶血，即菌落周圍無溶血環(huán)。

3． 根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)（C多糖抗原）的不同可分為A﹑B﹑C﹑D﹑E﹑F﹑G﹑H﹑K﹑L﹑M﹑N﹑O﹑P﹑Q﹑R﹑S﹑T等18個群，對人類有致病者90%屬于A群，偶見其他群鏈球菌致病。

4． 鏈球菌屬的種間鑒定

⑴．乙型溶血鏈球菌的鑒定：

a． 對桿菌肽（0.04U/片）（抑菌圈直徑≥10mm）敏感：A群鏈球菌（主要為化膿性鏈球菌）。

b． 對桿菌肽不敏感，膽汁七葉苷實驗陰性，但馬尿酸鈉水解實驗﹑CAMP實驗陽性：B群鏈球菌（主要為無乳鏈球菌）。

c． 對桿菌肽不敏感，膽汁七葉苷實驗陰性，馬尿酸鈉水解實驗陰性，CAMP實驗陰性：主要為馬鏈球菌﹑類馬鏈球菌﹑獸疫鏈球菌；對三者的區(qū)別實驗要加做海藻糖和山梨醇實驗。

d． CAMP實驗：將能產(chǎn)生β-溶血的金黃色葡萄球菌在血平板上劃一橫線接種，再將待鑒定菌于金黃色葡萄球菌3mm處垂直種一短線，若在有CO₂條件下培養(yǎng)5～6小時，或無CO₂條件下培養(yǎng)18～24小時，在兩細菌連接處出現(xiàn)一個半月型的加強溶血區(qū)即為CAMP實驗陽性。

⑵．甲型溶血鏈球菌的鑒定：

a． 草綠色鏈球菌：對桿菌肽敏感，對奧普托欣（Optochin）不敏感，膽汁溶菌實驗陰性，膽汁七葉苷實驗陰性，在高鹽中不生長。主要有變異鏈球菌，輕型鏈球菌，血鏈球菌，唾液鏈球菌等。

b． 肺炎鏈球菌：菌體呈矛頭狀，成雙排列，鈍端相對，尖端相背，較葡萄球菌，其他鏈球菌略大；在血平板上菌落細小﹑圓形﹑表面光滑﹑灰白色﹑半透明，開始時菌落呈扁平狀，以后中心塌陷，呈臍窩狀。與草綠色鏈球菌的主要區(qū)別是膽汁溶菌實驗陽性，對奧普托欣（Optochin）敏感。奧普托欣（Optochin）含量為5μg/片，抑菌環(huán)>18mm為敏感，<15mm為不敏感，15～18mm應(yīng)重復(fù)實驗。

⑶．腸球菌（D群鏈球菌）的鑒定：

溶血不定，主要是α-﹑γ-溶血；對桿菌肽不敏感，但其特異性實驗是膽汁七葉苷實驗陽性；若能在6.5%NaCl的心浸液肉湯中生長即為D群腸球菌，不能生長為D群非腸球菌。

⑷．鏈球菌屬鑒定的系統(tǒng)生化結(jié)果判斷

a． 1%美蘭牛乳

b． 膽汁七葉苷實驗：變黑為陽性。

c． PH9.6肉湯實驗：變渾濁為能在堿性環(huán)境中生長（陽性）。

d． 6.5%NaCl心浸液肉湯：由紫變黃為能在高鹽環(huán)境中生長（陽性）。

e． 精氨酸雙水解酶實驗：變紅色（對照不變色，仍為黃色）為陽性。

五．奈瑟氏菌屬和布蘭漢菌屬

奈瑟氏菌屬主要有腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布蘭漢氏菌屬只有卡他布蘭漢氏菌。兩者系需氧革蘭陰性球菌。

⑴     奈瑟氏菌的生物學(xué)特性：革蘭陰性球菌，需氧，卵圓形或腎形，無動力，氧化酶及觸酶均陽性。培養(yǎng)時對營養(yǎng)要求高，能在巧克力平板或有豐富營養(yǎng)的血平板上，在5～10%CO₂環(huán)境中生長。

⑵．鑒定過程：

a． DNA酶實驗陽性為布蘭漢氏菌，陰性則為奈瑟氏菌。

b． 能在普通血平板上生長的為其他奈瑟氏菌，在巧克力平板上生長的主要為腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。

c． 能使麥芽糖氧化分解產(chǎn)酸的是腦膜炎奈瑟氏菌，不利用麥芽糖的是淋病奈瑟氏菌。

      ⑶．幾種主要細菌對葡萄糖﹑麥芽糖﹑蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如下：

                                氧化分解產(chǎn)酸

⑷     DNA酶實驗：

a． 方法：將待鑒定細菌點種于含0.2%DNA的DNA瓊脂平板上，培養(yǎng)后用1mmol/LHCl覆蓋平板，菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)者為陽性。

b． 原理：某些細菌能產(chǎn)生DNA酶，可使DNA長鏈水解成由幾個單核苷酸組成的寡核苷酸鏈；長鏈DNA可被酸沉淀，而水解后形成后的寡核苷酸鏈則可溶于酸，故在DNA瓊脂平板加鹽酸，可在菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。（腸桿菌科中只有沙雷氏菌和變形桿菌可產(chǎn)生DNA酶，陽性球菌中只有金葡菌能產(chǎn)生DNA酶。）

   六．腸桿菌科

腸桿菌科是一大群生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性桿菌，其中對人致病性較強的鼠疫耶爾森菌（現(xiàn)已基本沒有流行）和傷寒沙門菌；4類常引起腹瀉和腸道感染的細菌（埃希氏菌﹑志賀氏菌﹑沙門氏菌﹑耶爾森氏菌）和8種常導(dǎo)致院內(nèi)感染的細菌（枸櫞酸桿菌屬﹑克雷伯菌屬﹑腸桿菌屬﹑多源菌屬﹑沙雷菌屬﹑變形桿菌屬﹑普羅威登菌屬和摩根菌屬）。另外還有很多細菌是腸道的正常菌群，但在一定條件下也可致?。l件致病菌）。

實驗過程中對于革蘭陰性桿菌首先要做氧化酶實驗，陰性為腸桿菌科細菌；陽性的為非發(fā)酵菌（我們實驗室還沒有簡單的系統(tǒng)鑒定方法，一般要儀器上卡檢測）或弧菌科細菌。

1． 腸桿菌科的系統(tǒng)生化

⑴．KIA試驗（克氏雙糖鐵）

組成：乳糖／葡萄糖=10／1（斜面／高層，其長度最好是都是2CM）

結(jié)果判斷：斜面或高層變黃色：陽性；不變色（紅色）：陰性

          高層中出現(xiàn)裂隙：產(chǎn)氣陽性

          高層中出現(xiàn)黑色（FeS）：產(chǎn)H₂S陽性

⑵．苯丙氨酸脫羧酶試驗

細菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫羧酶使苯丙氨酸氧化脫羧后生成苯丙酮酸，再與10%的FeCl₃試劑產(chǎn)成深綠色反應(yīng)。（變形桿菌屬﹑普羅威登菌屬和摩根菌屬為陽性，其他為陰性）

⑶．枸櫞酸鹽試驗（碳源利用實驗）

在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基中細菌能利用的碳源只有枸櫞酸鹽，分解后生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性，pH指示劑溴麝香草酚藍由淡綠色變?yōu)樯钐m色，即為枸櫞酸鹽試驗陽性。（埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，愛德華菌屬為陰性，其他為陽性）

注意：接種時不能被糖，蛋白胨污染，要單獨接種）

⑷．甲基紅（MR）試驗

細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進一步分解為甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基的pH下降至4.5以下時，加入甲基紅指示劑由桔黃色變桔紅色為弱陽性；變紅色為陽性。

培養(yǎng)基成分：葡萄糖蛋白胨水

試劑：甲基紅0.1g，酒精300ml，水200ml

主要用于大腸埃希菌（＋）和產(chǎn)氣腸桿菌（－）的鑒別；常與V-P實驗聯(lián)合使用，一般情況下兩者結(jié)果正好相反，但也有例外如奇變兩者同為陽性。

⑸．MIU（動力－靛基質(zhì)－尿素）試驗

①．動力：在半固體培養(yǎng)基中穿刺接種細菌培養(yǎng)后，若穿刺線周圍有細菌擴散生長，則為動力（＋）；清晰則為動力（－）。

②．靛基質(zhì)試驗（吲哚試驗）：某些細菌有色氨酸酶，能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再與試劑對位二氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而呈紅色。

③．尿素試驗：某些細菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿，再使培養(yǎng)基中的指示劑（0.4%酚紅）變紅色即為陽性。

         ⑹．硝酸鹽還原試驗

NO₃ˉ→→NO₂ˉ（大腸）

NO₃ˉ→→NH₄^＋

NO₃ˉ→→N₂（沙雷氏菌屬）

試劑甲：對氨基苯磺酸

試劑乙：α-萘胺

觀察結(jié)果時甲液和乙液要等量加入，立即或10min內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性。若不變色，則要加入鋅粉：①變紅色，說明硝還試驗為真陰性②仍不變色，說明硝還試驗真陽性，但原先還原產(chǎn)物不是NO₂ˉ。

陰性結(jié)果出現(xiàn)時有三種可能：①細菌不能還原硝酸鹽②亞硝酸鹽繼續(xù)分解生成氨或氮③培養(yǎng)基不適合細菌生長

腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。

         ⑺．氨基酸脫羧試驗

            細菌產(chǎn)生脫羧酶分解氨基酸使其脫羧生成胺和CO₂，雖然各種細菌所產(chǎn)生的脫羧酶不一定相同，但最后都能生成胺（賴氨酸→尸胺，鳥氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和CO₂。然后胺能使培養(yǎng)基變堿性，通過指示劑（溴甲酚紫）由黃變紫即為陽性。對照管（無氨基酸）為黃色。

            注意：①微量管接種好后要加石蠟，使培養(yǎng)基造成厭氧環(huán)境。（生成的胺更穩(wěn)定，還能誘導(dǎo)氨基酸脫羧酶的產(chǎn)生）

                 ②對照管如果不顯黃色，則結(jié)果不能判斷。

           應(yīng)用：除傷寒沙門氏菌，雞沙門氏菌外，其他沙門氏菌鳥AA，賴AA均為陽性；除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌也菌為陽性。

          ⑻．葡萄糖酸鹽試驗

             微量管在培養(yǎng)18～24h后，加班氏試劑，水浴煮沸10min，由蘭色變黃綠色到磚紅色即為陽性，不變?yōu)殛幮浴?SPAN lang=EN-US>

1． 腸桿菌的鑒定流程

⑴．根據(jù)苯丙氨酸脫羧酶實驗：

   （＋）：變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬

   （－）：埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，沙門氏菌屬，枸櫞酸桿菌屬，愛德華菌屬；克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬。

⑵．苯丙氨酸脫羧酶實驗陰性，加做葡萄糖酸鹽實驗

（＋）：克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬

a． 動力（－）：克雷伯菌屬，屬內(nèi)種的鑒定主要根據(jù)吲哚試驗（肺克吲哚實驗陰性，三個亞種鑒別試驗IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬結(jié)－＋－－）

b． 動力（＋），DNA酶（＋）：沙雷氏菌屬

動力（＋），DNA酶（－），枸櫞酸鹽（＋）：腸桿菌屬（主要是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者賴氨酸陰性，而后中為陽性）

動力（＋），DNA酶（－），枸櫞酸鹽（－）：哈夫尼亞菌屬

（－）：加做IMViC（靛基質(zhì)-甲基紅-VP-枸櫞酸鹽）試驗

a． IMViC（＋＋－－）：大腸埃希菌（H₂S－）或愛德華菌屬（H₂S＋）。

b． IMViC（^－／_＋＋－＋）：枸櫞酸桿菌屬

⑶．苯丙氨酸脫羧酶實驗陽性，根據(jù)產(chǎn)H₂S可分

（＋）：變形桿菌屬

                 屬內(nèi)主要鑒定試驗如下

（－）：普羅威登氏菌屬，摩根氏菌屬

       普羅威登氏菌屬：鳥氨酸：－；枸櫞酸鹽：＋（屬內(nèi)鑒定尿素酶及一些碳水化合物的產(chǎn)酸試驗，如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑海藻糖等）

       摩根氏菌屬：鳥氨酸：＋；枸櫞酸鹽：－（只有一個種：摩氏摩根氏菌）

⑷．志賀氏菌屬和沙門氏菌屬

這兩種菌屬在腸道選擇性培養(yǎng)基（SS、麥康凱）形成不發(fā)酵乳糖的透明或半透明的無色菌落，但一些沙門氏能產(chǎn)H₂S就會形成中心黑色的菌落，鑒定時在選擇性培養(yǎng)基上挑選可疑菌落進行鑒定。

a．志賀氏菌屬

   主要系統(tǒng)生化：KIA：K/A（只有福氏6型能產(chǎn)氣），H₂S（－）；MIU：－+/-－；

   苯丙：－；枸櫞酸鹽：－。

   報告結(jié)果時要根據(jù)其血清學(xué)的結(jié)果鑒定到種，即A群（痢疾志賀氏菌）﹑B群（福氏志賀氏菌）﹑C群（鮑氏志賀氏菌）﹑D群（宋氏志賀氏菌）；我國主要以B群和D群為主。

b．沙門氏菌屬

   主要系統(tǒng)生化：KIA：K/AG，H₂S（+/－）；MIU：＋－－；苯丙：－；枸櫞酸鹽：－。

  傷寒沙門氏菌的抗原結(jié)構(gòu)：菌體抗原（O抗原），鞭毛抗原（H抗原），包膜抗原（主要是Vi抗原）

 根據(jù)系統(tǒng)生化鑒定到沙門氏菌屬后，在根據(jù)其抗原結(jié)構(gòu)的特點，用血清學(xué)凝集分到種即可報告結(jié)果。

血清凝集步驟如下：

A-F多價O（＋）：

 O₂，Ha（＋）：A群（甲型副傷寒沙門氏菌）

 O₄，Hb（＋）：B群（乙型副傷寒沙門氏菌）

 O_6﹑7，Hc，Vi（＋）：C群（丙型副傷寒沙門氏菌）

 O₉，Hd，Vi（＋）：D群（傷寒沙門氏菌）

 O_3﹑10，Heh（＋）：E群

 O₁₁，Hi（＋）：F群

A-F多價O（－），做Vi血清因子凝集：（＋）濃菌液沸水煮沸30min，再用A-F多價O血清定群；（－）繼續(xù)以A-F以外的多價O血清凝集分型。

血清凝集注意：確定O群后， 一定要用H因子再做凝集；最終結(jié)果要以凝到H相后才能報告。

  七．非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

非發(fā)酵革蘭陰性桿菌是指一群不利用葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖﹑需氧或兼性厭氧﹑無芽胞的革蘭陰性桿菌。氧化酶試驗一般陽性，除不動桿菌屬和嗜麥芽假單胞菌外。

非發(fā)酵菌按下列試驗進行初步分屬

下面主要講一下銅綠假單胞菌：在血平板上形成的菌落大而扁平﹑濕潤﹑有金屬光澤，有生姜味的灰綠色或蘭綠色的菌落，并有明顯的溶血環(huán)。常有色素產(chǎn)生（綠膿素，青膿素，紅膿素，黑膿素等），在MH平板上更加明顯。

銅綠假單胞菌的最低鑒定標(biāo)準：①動力＋②氧化酶＋③枸櫞酸鹽＋④氧化分解GLU，木糖⑤不利用麥芽糖⑥賴﹑鳥氨酸脫羧酶試驗－⑦精氨酸雙水解酶試驗＋⑧H₂S－。

八．棒狀桿菌屬

          棒狀桿菌屬是一群革蘭陽性桿菌。菌體大小長短不一，常一端或兩端膨大呈棍棒狀。

          大多數(shù)存在于水和土壤中，其中有的是人和動物粘膜上的正常菌群，若是從無菌部位分離到棒狀桿菌，應(yīng)予以鑒定（如宮頸拭子）。

          在血平板上能生長，但生長不良好，菌落細小，濕潤。

      鑒定：根據(jù)觸酶和有無溶血，可分：

           ⑴．H₂O₂＋，無溶血：白喉﹑假白喉﹑潰瘍﹑干燥﹑假結(jié)核﹑馬棒﹑牛棒

           ⑵．H₂O₂－，有溶血：溶血棒﹑化膿棒﹑陰道棒

           ⑶．加做葡萄糖，麥芽糖，蔗糖產(chǎn)酸試驗，結(jié)合⑴⑵和標(biāo)本類型，基本上可以鑒定到是哪一種棒狀桿菌。