最近一期的PLoS ONE雜志（2007-11-14）刊登了我國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室童貽剛研究員發(fā)明的多外顯子cDNA的 直接快速克隆技術(shù)——“基因組DNA剪接”（genomic DNA splicing, GDS）技術(shù)（http://www./doi/pone.0001179）。該技術(shù)克服了常規(guī)cDNA克隆方法的諸多弊端（RNA提取，cDNA制備），直接從任何組織來(lái)源的基因組DNA中快速克隆任意全長(zhǎng)的cDNA序列。

  由于生物信息學(xué)的高速發(fā)展，人類(lèi)以及各種模式生物的基因組全序列均已公開(kāi)，可以在網(wǎng)上自由獲取。然而對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究者來(lái)說(shuō)，要研究某個(gè)基因，通常需要先 將其克隆。由于哺乳動(dòng)物基因組中存在大量的內(nèi)含子序列，大多數(shù)的基因都相當(dāng)長(zhǎng)，動(dòng)輒幾萬(wàn)堿基對(duì)，對(duì)其進(jìn)行基因操作相當(dāng)麻煩（常規(guī)克隆載體對(duì)插入片段的大小 有限制，過(guò)大的片段不易克隆，即使克隆成功也容易產(chǎn)生缺失；此外大片段含有過(guò)多的限制性酶切位點(diǎn)，使后續(xù)的基因操作變得十分困難）。

  對(duì)該問(wèn)題的解決辦法就是使用cDNA代替基因組DNA。由于完整的cDNA序列在自然界中并不存在，需要采用人工的方法，將細(xì)胞中的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄才 能獲得，因此克隆cDNA序列必須經(jīng)過(guò)mRNA的制備以及逆轉(zhuǎn)錄等步驟，完成這些步驟均需使用特殊的試劑盒，而且在我們的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中RNA酶無(wú)處不在 （RNA酶為實(shí)驗(yàn)室常用的試劑，在所有的動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)），而且十分頑固，難以滅活，很容易給cDNA的制備造成麻煩。常規(guī)cDNA克隆方法的另外一個(gè)缺 點(diǎn)就是常常需要獲取特定的動(dòng)物組織，因?yàn)榻?jīng)過(guò)分化的不同器官組織表達(dá)的基因不同，許多基因僅在一些特殊的組織中表達(dá)，要順利的克隆這些基因，選擇高表達(dá)的 組織往往是必要的，但是有些組織在動(dòng)物機(jī)體中數(shù)量稀少，給克隆相應(yīng)的基因造成很大的問(wèn)題。

  童貽剛等發(fā)明的genomic DNA splicing全長(zhǎng)cDNA克隆技術(shù)，克服了上述所有的缺點(diǎn)。該技術(shù)無(wú)需采用逆轉(zhuǎn)錄的方法制備cDNA，因此也就無(wú)需制備RNA，更不用操作特定基因高 表達(dá)的器官組織。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)單快速，僅使用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和試劑，即可輕易完成多外顯子cDNA的全長(zhǎng)序列的克隆。

原文檢索：
Rapid Assembly of Multiple-Exon cDNA Directly from Genomic DNA