?具門第一章概述

菌種是食用菌生產(chǎn)的根本。菌種性狀的優(yōu)劣直接影響到生產(chǎn)的成敗和豐歉。因此，凡食用菌培植人員，都必須認(rèn)真做好菌種的培育工作。

所謂菌種培育，就是選擇和培育優(yōu)良菌株，其目的無非是取代或改革原有菌種，以提高其產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，并使之不斷適應(yīng)工藝改革的需要。

培育菌種，需要一定的設(shè)備和技術(shù)條件。

缺乏制種設(shè)備和技術(shù)的單位或個(gè)人，可向我校購買母種或原種，然后擴(kuò)大培育生產(chǎn)種，也可以直接購買生產(chǎn)種來進(jìn)行生產(chǎn)。

第二章 菌種的分類

一、母種:耳(菇)在成熟時(shí)落下的孢子或耳(菇)體組織在瓊脂培養(yǎng)基上萌發(fā)分離的菌絲在生產(chǎn)上稱為母種。

但母種不能直接做為生產(chǎn)種使用，原因是成本太高，還必須擴(kuò)大成原種，再轉(zhuǎn)為生產(chǎn)種。才可使用。

二、原種:將母種菌絲擴(kuò)接到鋸木屑或代鋸木屑培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng)25-40天后，成長的菌絲體，叫做原種。原種還必須通過擴(kuò)大，才能應(yīng)用于生產(chǎn)上。"

三、生產(chǎn)種:原種再接到鋸木屑培養(yǎng)基上或代鋸木屑培養(yǎng)基上擴(kuò)大繁殖培養(yǎng)，由此發(fā)育而成的菌絲體，叫做栽培種?？梢灾苯討?yīng)用到生產(chǎn)上。

第三章 制種所需的主要設(shè)備和工具

1 、接種箱或接種室:

接種箱:是一種可以嚴(yán)密關(guān)閉的小箱子，它的體積小，容易消毒，結(jié)構(gòu)簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，只花一些木料，纖維板，玻璃等，就可以制成。接種箱的兩邊，各留兩個(gè)直徑12公分的圓洞，洞口上訂上套布，以便兩手伸人箱內(nèi)操作，有條件的單位或個(gè)人，箱內(nèi)可安紫外線滅菌燈一支，箱體不宜過大或過小，過大操作不方便，不便于挪動(dòng)，過小則接種瓶數(shù)太少，一般為長1.5米，寬0.8米-0.9米為宜。

接種室:是一間可以嚴(yán)密關(guān)閉的小房子，與接種箱的作用一樣，接種室應(yīng)設(shè)在向陽、干燥之處，面積不宜過大，一般5-7平方米為宜。接種室外面應(yīng)設(shè)有一個(gè)小緩沖室。門不能對開，要安裝有拉門，室內(nèi)的墻壁和地面要清潔光滑，便于消毒，室內(nèi)要裝有電燈和紫外線滅菌燈。

本接種箱和接種室比較，雖然接種箱接種數(shù)量不多，操作不太方便，但其結(jié)構(gòu)簡單，體積小，容易消毒，人在箱外操作，不致于吸入有毒氣體，夏季接種，不感到悶熱，目前生產(chǎn)上，多數(shù)都用接種箱接種。當(dāng)然如果經(jīng)濟(jì)條件許可,而且很有必要時(shí)，建造接種室,對于工廠化,大規(guī)模生產(chǎn)更加有利。

2、消毒滅菌鍋:目前使用的消毒鍋有高壓蒸汽滅菌和常壓滅菌鍋兩種。高壓蒸汽滅菌，具有時(shí)間短，效果好和省燃料等優(yōu)點(diǎn)，但投資大。它分手提式，立式和臥式幾種(市場均有出售)手提式的容量小，適于試管培養(yǎng)基、無菌水和一些器具消毒之用。立式和臥式的容積大，一次可消毒750毫升的菌種瓶數(shù)十瓶或幾十瓶。一般用于原種和生產(chǎn)種培養(yǎng)基的消毒，如生產(chǎn)規(guī)模大，還要建常壓滅菌灶。

3、恒溫室與恒溫箱:

恒溫箱:制作母種和少量原種時(shí)使用。所占面積小，可用恒溫箱進(jìn)行培養(yǎng)。它可用木料自制，簡易的恒溫箱，其規(guī)格90-120厘米，寬80-100厘米，分成3-5層，每層相隔30厘米，安上熱力絲或250瓦紅外線燈，在箱的一角安裝一臺(tái)恒溫調(diào)節(jié)器，箱的頂端插入一支溫度計(jì)，可以隨時(shí)觀察箱內(nèi)溫度。

恒溫室:它是溫度恒定的小房子，在菌種數(shù)量多時(shí)，必須用恒溫室進(jìn)行保溫，其大小要視菌種生產(chǎn)量的數(shù)量而定。一般340厘米見方的房間為理想。室內(nèi)安裝3-6盞250瓦的紅外線燈，架層40厘米，如有條件，也可安裝一臺(tái)恒溫調(diào)節(jié)器，使其自動(dòng)調(diào)溫。一般一間房層數(shù)為6層的恒溫室，可放750毫升的菌種瓶3000左右。

4、電冰箱:用于菌種的保存和安全越夏。有在基內(nèi)菌絲分離時(shí)，將分離材料在冰箱中冷凍一段時(shí)間，可以把蟲害和其它雜菌殺死。

5、標(biāo)準(zhǔn)天平或工業(yè)天平:用于稱量各種實(shí)驗(yàn)樣品和培養(yǎng)料。

6、溫度計(jì):用于測定恒溫箱、冰箱、恒溫室或滅菌灶的溫度。

7、干濕溫度計(jì):用于測定培養(yǎng)室的溫、濕度變化情況。

8、試管:用于制備斜面培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)母種。規(guī)格20x200毫米、18x180毫米、21x200毫米、15 x150毫米。

9、三角燒瓶及燒杯:用于制備母種。

目 10、培養(yǎng)皿:用于制備平板培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)菌種。常用規(guī)格為9-10厘米。

11、量筒或量杯:用于量取溶液或蒸餾水。規(guī)格有200毫升、500毫升、1000毫升等幾種。

12、漏斗:制備培養(yǎng)基時(shí)，用于過濾或裝管。18、酒精燈:用于接種操作時(shí)滅菌消毒。

14、吸管:用于吸取和稀釋孢子液。常用為1毫升、5 毫升。

15、注射器:用于吸取平菇孢子液使用。

16、菌種瓶:用于培養(yǎng)原種和栽培種，廣口玻璃瓶容量為750毫升，口徑為3-5厘米。罐頭瓶可以用于平菇生產(chǎn)種的制作。

17、棉花:用于試管或菌種瓶的瓶塞。18、鋁鍋:用于蒸煮瓊脂培養(yǎng)基。

19、接種刀和接種針:用于菌種的分離，移植操作。20、消毒脫脂棉花、紗布、解剖刀、鑷子、剪刀、小木架、手套、鋼鉤、滑石粉等其他工具。

第四章 母種培養(yǎng)基的成份制作和滅菌

無論是銀耳、平菇、黑木耳、猴頭的母種培養(yǎng)基，一般都是瓊脂、馬鈴薯培養(yǎng)基。其成份:

馬鈴薯200克瓊脂20克 葡萄糖20克 水1000毫升。制法:將馬鈴薯洗凈去皮，(發(fā)芽的把芽眼挖掉)稱200克，切成薄片，放入鋁鍋中，加水煮沸30分鐘，撈起，用6層紗布過濾取汁。稱瓊脂20克，用剪刀剪碎，加入馬鈴薯液中，繼續(xù)加熱，并用筷子不斷攪動(dòng)，使蹤脂不斷溶化，再加水至1000毫升，然后加入葡萄糖，稍煮幾分鐘后，用六層紗布過濾一次，趁熱分裝試管內(nèi)，裝量為試管的五分之一處，隨印毫上棉塞，立放于小箱或小筐內(nèi)，分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基沾在試管壁上和口上。以免發(fā)生雜菌感染。

試管的棉塞要求塞的松緊適度，并與試管壁緊密相接，以防止棉塞脫落而使雜菌進(jìn)人，棉塞通常要塞入三分之二，留三分之一在外面，以便拔出。

滅菌:裝管后的培養(yǎng)基，要及時(shí)進(jìn)行高溫滅菌，試管培養(yǎng)基的滅菌，因數(shù)量少，以采用手提式高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，且消毒徹底。使用前，必須徹底檢查消毒鍋的安全閥、放汽閥、壓力表、噴汽管是否符合使用要求，并確定鍋內(nèi)的水量，以防燒干，發(fā)生事故。滅菌時(shí)，將試管每十支捆成一捆，外邊用牛皮紙包上，垂直放于鍋內(nèi)進(jìn)行消毒滅菌。在1-1.2公斤/厘米2的壓力下，保持30分鐘，然后把消毒鍋取下，待壓力表自動(dòng)降到“0”時(shí)，再打開鍋蓋，將試管取出，斜放在桌子上的小木板上，使斜度達(dá)試管長度的二分之一或三分之二，冷卻后即成了固體斜面培養(yǎng)基。

第五章 銀耳菌種的培育

銀耳菌種的培養(yǎng)包括:母種的分離和提純，原種的培養(yǎng)和生產(chǎn)種的擴(kuò)大，現(xiàn)分述如下:

-、母種的分離和提純:銀耳母種分離的方法，有孢子分離法和基內(nèi)菌絲分離法。前一種屬有性繁殖，分離相當(dāng)復(fù)雜，菌種不易退化，因孢子個(gè)體差異大，菌種變異也大，不能直接擴(kuò)大生產(chǎn)，還要幾次篩選才能使用。后一種屬無性繁殖，分離方法簡單，菌種純度不高，容易退化，不能轉(zhuǎn)代太多，現(xiàn)將兩種分離方法介紹如下:

(一)孢子分離法:

①培養(yǎng)基成分制作和滅菌(同第四章)。

②種耳的來源:根據(jù)我地區(qū)的情況，野生的種耳不容易得到，都是采取用袋栽或瓶栽的銀耳作為種耳。

③種耳的選擇:選種耳是一項(xiàng)十分細(xì)致的工作，在幼長到3-5厘米左右時(shí)，可從中選出50-70朵生活力強(qiáng)。生長最快，朵形大，色澤白，耳片大而厚，無病蟲害的作為種耳，集中排列在一起，編上號(hào)碼，仔細(xì)觀察生長情況再選出13-15朵，重新編上號(hào)碼，觀察生長情況，最后選出最優(yōu)良的3-5朵，作為種耳。

④種耳采集的時(shí)間:種耳選出后，待孢子成熟進(jìn)行樂集，一般是在出耳后12-15左右，在這時(shí)若在種耳底部鋪上一塊塑料布，經(jīng)一天后，用手摸薄膜，有潤滑感，這表明孢子已開始散落下來，(一般孢子彈射的時(shí)間為1-2天)此時(shí)即可將種耳移到接種箱內(nèi)進(jìn)行分離。

⑤種耳的表面消毒:因種耳表面和基部還帶有大量雜菌，因此要首先經(jīng)過表面消毒，滅蟲處理，方法是，將種耳的瓶或袋，用75%的酒精表面擦洗2-4遍，移入裝有敵敵畏或樂果的容器中，放置24小時(shí)(不能將種耳浸在藥液中)以便殺死附在耳基底部和周圍的雜菌和害蟲。

⑥孢子采取:將經(jīng)過消毒的燒杯4只、不繡鋼鉤、接種針、剪刀、鑷子、無菌水、無菌紗布、酒精燈、75%酒精裝有經(jīng)滅菌的瓊脂培養(yǎng)基三角瓶3-5個(gè)，試管10-20支，以及種耳一起放入接種內(nèi)，用甲醛每米310毫升,高錳酸鉀每米*8克,混合汽化消毒30-40分鐘。

操作人員先用2%來蘇爾洗手涼干，然后再用75%的酒精洗手涼干，擦上滑石粉，戴上手套，再用75%的酒精洗手，趁濕伸入接種箱內(nèi)，先擦工作面玻璃，點(diǎn)燃酒精燈，把無菌水分別倒入3個(gè)燒杯中，順序排好，再將75%的酒精倒入另一個(gè)燒杯中，用剪刀在種耳上，剪取一塊母指大小的耳片，用鑷子夾住，放在75%的酒精中浸洗5-10秒鐘，然后迅速移入第一個(gè)燒杯中，浸洗一分鐘，再移入第二個(gè)第三個(gè)燒杯中，各浸洗一分鐘，用無菌紗布把附在耳片表層的水吸干，然后掛在鋼鉤上并迅速掛入三角瓶內(nèi)(耳片應(yīng)距三角瓶培養(yǎng)基約2厘米左右)為了選優(yōu)，可多掛幾個(gè)瓶子。

種耳掛瓶后，把三角瓶移入23-25℃的溫度中培養(yǎng)24小時(shí)，三角瓶培養(yǎng)基上可看到霧狀的孢子后，移入接種箱內(nèi)，取出耳片和鋼鉤，(操作按無菌操作 要求)塞 上棉塞，再移人溫室中培養(yǎng)2-3天后，在培養(yǎng)基表面上就可以看到白色，糊狀，邊緣光滑的銀耳菌落，此時(shí)把三角瓶移入無菌箱內(nèi)，用接種針挑取少許孢子，將它移接于經(jīng)消毒的馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

(二)孢子的稀釋和提純:

①提純的目的:由于種耳在孢子彈射過程中，盡管操作如何的嚴(yán)密，總是難免混有其它雜菌來影響孢子純度，為了獲得純度較高的銀耳孢子，必須根據(jù)銀耳的形態(tài)特征采取稀釋提純來得到較優(yōu)良的銀耳芽孢。

②提純稀釋孢子的辦法，稀釋孢子是一種很細(xì)致的工作，具體方法:取5個(gè)三角瓶，編上1、2、8、4、5順序號(hào)，各放入直徑0.3毫米的玻璃珠20-30粒，再倒人10毫升蒸餾水，塞上棉塞，取直徑9厘米的培養(yǎng)皿若干個(gè)，各倒人馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基0。3厘米，用紗布扎緊，迮同三角瓶，一起放入手提式高壓鍋內(nèi)進(jìn)行消毒時(shí)間30分鐘，冷卻備用。

取出經(jīng)培養(yǎng)成熟的銀耳芽抱試管一支，連同已冷卻的三角瓶，培養(yǎng)皿，接種針，經(jīng)消毒的1毫升吸管等，一起放入接種箱內(nèi)，進(jìn)行汽化消毒，30分鐘后即可操作，用接種針挑取少許銀耳芽孢，放入1號(hào)三角瓶內(nèi)，輕輕搖動(dòng)1分鐘，待孢子分散后，用吸管吸1毫升，注入第二個(gè)三角瓶內(nèi)，按此法作完5個(gè)三角瓶，最后用吸管在第五個(gè)三角瓶內(nèi)吸1毫升懸浮液注入培養(yǎng)皿內(nèi)，用紗布包緊，輕搖培養(yǎng)皿，使孢子懸浮液均勻分布于培養(yǎng)皿表面，再翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，移入23-25℃的恒溫下培養(yǎng)，3-5天后，可以看到在培養(yǎng)基表面上有邊緣整齊，光滑中間凸起銀耳孢子出現(xiàn)。這就是純的銀耳孢子，然后再在接種箱內(nèi)移接到新的試管培養(yǎng)基上，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，在22-24℃的溫度下，培養(yǎng)20-30天，發(fā)現(xiàn)有菌絲出現(xiàn)，在移入新的培養(yǎng)基上，進(jìn)行移管培養(yǎng)，使進(jìn)一步提純。

(三)香灰菌絲的分離:

分離香灰菌絲一般都是從袋栽的或瓶栽的菌絲體進(jìn)行分離。其方法是取栽培的培養(yǎng)基一個(gè)，去掉耳基先用75%的酒精將袋或瓶擦幾遍，連同接種工具和經(jīng)消毒的斜面試管培養(yǎng)基，一起放入接種箱內(nèi)，進(jìn)行汽化消毒，時(shí)間30分鐘后，操作人員進(jìn)行操作，用接種刀把瓶子或袋子底部打破，這時(shí)左手拿住試管底部，用右手的母指食指和中指夾住接種針，小指和無名指夾住試管棉塞，在酒精燈火焰上方拔出，把接種針先在火焰上方燒紅，放在試管培養(yǎng)基上蘸一下，令其冷卻，然后，用接種針從中取出米粒大小的菌絲，迅速通過火焰，移人試管中，塞上棉塞，移人23-25℃溫度下培養(yǎng)，經(jīng)5-7天，培養(yǎng)基底部變黑，再經(jīng)過3-5次反復(fù)提純，即可獲得純的香灰菌絲母種。

(四)銀耳母種和香灰母種的混合:選由芽孢萌發(fā)的銀耳菌絲母種試管一支，與瓊脂培養(yǎng)基試管若干支，連同接種工具放入接種箱內(nèi)，采用母種試管移接法，挑取一塊小米粒大小的銀耳菌絲移接于瓊脂培養(yǎng)基試管中央塞上棉基，移人23-25℃恒溫箱中，培養(yǎng)6-8天，菌絲長至黃豆大小時(shí)，再連同香灰母種一起移進(jìn)接種箱內(nèi)，接入香灰母種，然后移入22-24℃的溫度下培養(yǎng)，2-3天后接種塊上出現(xiàn)濃白色的粗短菌絲團(tuán)。12-15天左右，白毛團(tuán)的上方出現(xiàn)紅、黃色水珠時(shí)，說明母種已培養(yǎng)成熟，即可進(jìn)行原種擴(kuò)大，每支試管只能移接1-2瓶原種。

二、基內(nèi)菌絲分離法:就是從袋栽或瓶栽銀耳子實(shí)體基部分離出新菌絲的方法。具體方法是從出耳早，出耳率高，無病蟲害的栽培室中，選擇生活力最強(qiáng)的數(shù)十朵，進(jìn)行變溫培養(yǎng)，增加菌絲體的生活力，經(jīng)培養(yǎng)幾天后，待子實(shí)體直徑達(dá)4厘米時(shí)即可作為分離用的母體，再從中選出最理想的一朵，用刀子割掉子實(shí)體，放于0℃的冰箱或有樂果敵敵畏的溶器中24個(gè)小時(shí)，以便殺死害蟲，然后用75%酒精擦洗四基和袋瓶外邊的雜質(zhì)，連同接種工具，母種培養(yǎng)基等一切工具放入接種箱內(nèi),進(jìn)行汽化消毒時(shí)間30分鐘后用接種刀挖去耳基下面1.5厘米的老菌根，將露出的白色菌絲,用接種針挑取米粒大小的一塊，迅速移人母種試管培養(yǎng)基的中央，輕輕地脫掉接種針，塞上棉塞，一次可接種100-200支試管，接種后放入23-25℃的溫室中培養(yǎng)，2-3天，分離物的邊緣，可看到白色菌絲，5-7天白色菌絲萌發(fā)蔓延,7-10天布滿整個(gè)培養(yǎng)基表面，出現(xiàn)禍黑色分泌物，10 -15天，接種塊扭結(jié)團(tuán)出現(xiàn)紅、黃色水珠，再經(jīng)過2-3次提純，即可進(jìn)行原種擴(kuò)大。

三、原種的擴(kuò)大培養(yǎng):

為滿足菌種生產(chǎn)的需要，應(yīng)選出優(yōu)良的，純度較高的母種進(jìn)一步擴(kuò)大為原種。

(一)原種培養(yǎng)基配方和制作:

配方:

干木屑 100斤 干木屑 100斤

麥麩 35斤 細(xì)米糠 30斤

石膏粉 3.7斤 黃豆粉 5斤

硫酸鎂 0.35斤 石膏粉 2斤

磷酸二氫鉀0.35斤 白 糖 1.5斤

白糖 1.3斤 硫酸鎂 0.5斤

旦白棟 0.6斤 (水 125-145斤

水 135-140斤

制法:先稱取木屑、麥皮、石膏粉，混合拌勻，再稱取白糖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、旦白棟，用開水化開，記下用水?dāng)?shù)，用總水量減去開水?dāng)?shù)，再稱出所加的水，把兩種水混合，加入木屑混合料中，翻抄幾遍，用細(xì)篩子篩兩遍，結(jié)團(tuán)的打碎再過篩，使整個(gè)料物全部均勻，濕度以手抓起培養(yǎng)料捏緊能成團(tuán)，落下會(huì)散開為準(zhǔn)，PH值為5.4-5.8。然后裝入透明的750毫升菌種瓶中，用壓腳壓實(shí)表面成凹形，裝量為瓶高的三分之二，裝瓶結(jié)束后，用布或棉花把沾在瓶壁內(nèi)外的培養(yǎng)基擦凈，塞上棉塞，棉塞不宜過大和過小，過緊瓶內(nèi)氧氣不足，菌絲生長不好，過松，雜菌容易感染。

棉塞制作:先取若干大小的適中的棉花，放在左手的掌心，再把碎棉花集中放在成塊棉花的中央，然后用右手把四周雜亂的棉花集中扭成一個(gè)組頭。把紐頭放在瓶口上邊，邊旋轉(zhuǎn)邊塞進(jìn)瓶口，這樣就形成上下底都光滑的棉塞。

(二)原種培養(yǎng)基的滅菌:原種培養(yǎng)基的滅菌和母種培養(yǎng)基的滅菌要求一樣嚴(yán)格，因體積大，數(shù)量也多，一般用立式和臥式的消毒鍋滅菌，在壓力1.4公斤/厘米2下,滅菌2個(gè)小時(shí)。滅菌工作完畢后，不能直接放氣，先熄滅熱源，使其自然冷卻，約20分鐘，再打開鍋蓋，使蒸氣把棉塞烘干取出培養(yǎng)基，冷卻備用。

(三)原種移接:選出已培養(yǎng)成熟的母種試管若干支，消過毒的鋸木屑培養(yǎng)基，接種工具，一起放入接種箱內(nèi)進(jìn)行氣化消毒30分鐘，按操作要求進(jìn)行工作，用左手拿住母種試管，右手拿住接種針在酒精燈上方一寸左右的地方，拔掉棉塞，再用接種針在母種的白毛團(tuán)四周劃一圈，以便把 香灰菌絲體隔開，然后用接種針，在白毛團(tuán)的中央一鉤迅速離開母種試管，懸在空中，左手迅速把母種試管放下，換上原種瓶，靠近酒精燈，用右手小指和無名指夾住棉塞，輕輕拔出，迅速將右手接種針上的母種接入原種培養(yǎng)基中央，塞上棉塞，一支母種試管只能接一瓶原種，照此法，接完所有的培養(yǎng)基。

注意:操作人員思想要高度集中，動(dòng)作要熟練，迅速準(zhǔn)確，特別在母種離管后，要防止接種針上的母種丟落，而造成接種失敗。在整個(gè)過程中，拔棉塞，母種接入瓶內(nèi)等動(dòng)作，都不能離開酒精燈。

3 (四)原種培育:原種接種后，放入24-26℃的恒溫室中培養(yǎng)，2-3天后，在母種塊邊緣會(huì)出現(xiàn)白色粗短的菌絲，這時(shí)把溫度恒定在28-25℃，空氣相對濕度絕對保持70%以下，每4小時(shí)通風(fēng)一次，時(shí)間20-30分鐘，每天檢查一次，若發(fā)現(xiàn)有感染的，要及時(shí)清理出去，4-7天，每天檢查一次，每3小時(shí)通風(fēng)一次，時(shí)間20分鐘，還要保持室內(nèi)干燥。

7-10天溫度22-24℃，空氣相對濕度70%左右，每天通風(fēng)8-10次，時(shí)間20分鐘。兩天檢查一次。這時(shí)要把瓶子散開，距離2厘米，10-15天，溫度保持20-22℃，空氣相對濕度70%左右。每2小時(shí)通風(fēng)-次，時(shí)間20分鐘，培養(yǎng)室如能保持在22℃全天可以通風(fēng)。

15天后保持18-20℃，保持室內(nèi)干燥、清潔，加強(qiáng)通風(fēng)量，增加光照強(qiáng)度。18-25天，在培養(yǎng)基表面出現(xiàn)粉紅色的水珠，然后出現(xiàn)子實(shí)體，說明原種已培養(yǎng)成熟即可擴(kuò)接生產(chǎn)種。

四、生產(chǎn)種的擴(kuò)大和培養(yǎng):

由于原種的數(shù)量還比較少，但成本也高，所以必須再擴(kuò)大培養(yǎng)為栽培種，才能廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)上，栽培種的制作方法和原種基本相同。

1、培養(yǎng)基配方:課卜 干木屑 100斤 干木屑 100斤

麥 麩 37斤 麥 麩 80斤

石膏粉 3.5斤 石膏粉 2斤

硫酸鎂 0.4斤 白糖 1.5斤

磷酸二氫鉀 0.4斤 過磷酸鈣 .11斤

白糖 1.4斤 黃豆粉 2斤

旦白棟 0.7斤 水 125-145斤

水 140斤

制法和原種培養(yǎng)基一樣，滅菌:由于數(shù)量之多，一般都是用常壓滅菌灶滅菌，把瓶子橫放在滅菌灶內(nèi)，在100℃時(shí)，保持10個(gè)小時(shí)。滅菌后，要輕輕把蓋子揭開，排出蒸氣防止棉塞受潮。

2、接種:培養(yǎng)基滅菌后，待溫度下降到30℃以下時(shí)連同原種，接種工具一起放入接種箱內(nèi)進(jìn)行汽化消毒，按照栽培拌種的方法，在酒精燈上，拔掉棉塞，倒出積水，瓶口永遠(yuǎn)不離燈頭，拿接種鏟刮掉瓶壁和表面上的雜物，刮出的雜物放在小黑碗內(nèi)，如有小耳，也要輕輕刮掉，用接種鏟在瓶內(nèi)深切一公分，然后把它輕輕壓碎，如米粒大小，再往下挖1.5公分的香灰菌絲，二者充分拌勻，拌好后松料2.5公分為宜，菌種拌好后，放在小木架上，用接種鏟取蠶豆大小放在栽培種培養(yǎng)基中間，一瓶原種可擴(kuò)生產(chǎn)種40瓶，按此法作完所有的培養(yǎng)基。

3、培養(yǎng):栽培種接種后，移入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，溫度25℃，12小時(shí)后，菌種定植在培養(yǎng)基上，2-3天后，接種塊上可以看到白色纖細(xì)的菌絲在萌發(fā)，這時(shí)保持室內(nèi)干燥衛(wèi)生，空氣相對濕度保持70%以下每天檢查一次，發(fā)現(xiàn)感染，要及時(shí)清理出去。7天以后，瓶面菌絲向下伸3-4厘米，菌絲變的粗短，似羽毛狀，香灰菌絲逐漸增粗，出現(xiàn)藍(lán)色，草綠色和黑褐色的細(xì)紋，接種塊逐漸變成珠形扭結(jié)團(tuán)，由于菌絲不斷增多增粗，瓶內(nèi)溫度也不斷增高，因此要把瓶子散開，間隔2厘米，通風(fēng)降溫，每4小時(shí)通風(fēng)一次，時(shí)間30分鐘，溫度保持22℃左右，濕度70%以下，每2天檢查一次，發(fā)現(xiàn)感染者，要及時(shí)清理。

7-12天菌絲向下延伸5-6厘米，12-15天出現(xiàn)白色顆粒，出現(xiàn)白色水珠紅色黃色，15-18天菌絲接近到底有濃白芽孢出現(xiàn)，并逐漸扭結(jié)，18-20天后出現(xiàn)子實(shí)體原基，繼而出現(xiàn)子實(shí)體，黃紅水珠變濃，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長，子實(shí)體由紫色變?yōu)榘咨?，并逐漸增大，證明栽培種已經(jīng)培育成熟，即可用于生產(chǎn)上。

五、對生產(chǎn)種優(yōu)劣的鑒別:

適齡菌種 春秋 15-28天 28-35天

A 夏季 適令13-25天 老令25-30天

菌齡鑒別 冬季 18一32天 32-40天

B適宜菌種質(zhì)量鑒別:春秋兩季正常情況下，15-18天菌絲尚未到底，菌絲發(fā)展邊緣清晰，芽孢濃白有吐水現(xiàn)象(白水或黃水)18-23天，菌絲到底，有黃紅水珠或濃黃紅水珠出現(xiàn)，有紫色子實(shí)體出現(xiàn)。23-28天有濃黃紅積水，子實(shí)體豐滿，由紫色變?yōu)榘咨?/span>

C老化菌種菌令的鑒別:春秋35天以后

夏季30天以后冬季40天以后

①有重紅或黑色積水(水膠質(zhì))

老化菌種質(zhì)②培養(yǎng)基的香灰菌絲從底部向上逐漸消

D 失，有時(shí)出現(xiàn)微黃或黃色。

量的鑒別:③長有豐滿子實(shí)體的銀耳原基會(huì)明顯和

培養(yǎng)基分開。

六、菌種的保藏:

一般都是遵照干燥低溫冷凍減少氧氣的宗旨。

A斜面低溫保存法，是最簡單最常用的方法，斜面培養(yǎng)母種成熟后，存放4-6℃低溫保存2-3月轉(zhuǎn)代一次，為減少水分蒸發(fā)，管口可用蠟封。此法適于所有食用菌。

B液體石蠟保存法，所有食用菌都可按此法保存，時(shí)間可達(dá)三年之久，每年轉(zhuǎn)管一次，用此法不必放在冰箱內(nèi)。石蠟也叫礦油，是一種導(dǎo)瀉劑，醫(yī)藥商店都有出售，用前先放入三角瓶內(nèi)，加上棉塞，高壓滅菌2次后，用吸管吸入試管內(nèi)高出斜面尖端1厘米，塞上棉塞，棉塞與管口平，再用石蠟封口，使用時(shí)，不必倒出石蠟，只要接種工具從斜面上取一小塊菌絲，在無菌水中洗干凈，即可接種。

七、雜菌感染的原因:

培養(yǎng)基消毒不徹底，菌種不純混有雜菌，接種工作不認(rèn)真，培養(yǎng)室消毒不徹底。接種人員消毒不徹底。

第六章 平菇菌種的制作和培育

平菇菌種的培育，也包括母種的分離，原種擴(kuò)大生產(chǎn)種擴(kuò)大培養(yǎng)三個(gè)環(huán)節(jié)。

一、母種的分離:

平菇母種分離有兩種:一是孢子發(fā)芽培養(yǎng)法，另一種是組織分離法，孢子發(fā)芽培養(yǎng)法,是用平菇孢子進(jìn)行繁殖的，也叫有性繁殖，通過孢子有性過程培養(yǎng)成的翡絲，是經(jīng)過雙親結(jié)合具有雙重遺傳性，生活力強(qiáng)，質(zhì)量好，產(chǎn)量高。

組織分離法是平菇子實(shí)體上分割某一組織，然后進(jìn)行培養(yǎng)繁殖從而獲得的菌絲，這種方法稱無性繁殖，用這種方法培養(yǎng)出來的菌絲，生活力較弱，種性容易簡便，菌絲發(fā)育也快，適用快速生產(chǎn)。

(一)配方與制作:配方:

①馬鈴薯200克 瓊脂20克 葡萄糖20克水1000毫升

②黃豆粉40克葡萄糖20克 瓊脂20克水1000毫升

作法與銀耳試管培養(yǎng)基一樣，消毒滅菌也相同。

(二)種菇的選擇:優(yōu)質(zhì)的平菇菌種，來源于優(yōu)良的種菇選的時(shí)時(shí)一般在12月上旬或一月上中旬的第一、二批菇中挑選,因?yàn)檫@時(shí)氣溫適宜,菌絲生活力強(qiáng)，平菇生長健壯，能正常成熟，種菇應(yīng)從菌絲生長健壯，無雜菌，無病蟲害，出菇均勻，平菇長勢好的菌床選取，挑選的對象是菌傘厚，菇形園潔白，菌柄粗壯的單生菇，插上標(biāo) 簽，經(jīng)常觀察。到種菇快要成熟時(shí)，用小鏡子觀察，將成熟還沒有開傘的，菌膜薄而拉的緊采下來，采收要適時(shí)，過早過晚都不行，過早，種菇未成熟，孢子不易落下或萌發(fā)，若過遲，菌膜已破裂，菌褶外露，容易污染雜菌，用酒精消毒時(shí)，也會(huì)殺死孢子。因此要正確掌握種菇的成熟度。及時(shí)采收，以保證質(zhì)量。

(三)采收和培養(yǎng)孢子:種菇采集后，切去帶泥的根部，用清水洗凈，放入接種箱內(nèi)，浸在75%的酒精中消毒一分鐘，然后再在盛有無菌水的燒杯中洗2-3遍，用紗布把菇體表面吸干，迅速地把種菇插入孢子收集器的三角架上，并在紗布上倒入少量的無菌水，以滿足種菇開傘落孢子時(shí)所需的濕度。然后用紗布將整個(gè)孢子收集器包好，放在恒溫下(20-22℃)培養(yǎng)兩天左右即可落下孢子。采集孢子時(shí)要把孢子收集器移人接種箱內(nèi)，同時(shí)把培養(yǎng)基試管，5毫升注射器和接種工具，一起放入接種箱內(nèi)。進(jìn)行汽化消毒。然后進(jìn)行操作，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)器，使孢子均勻分布水中，斜放片刻，稍沉淀，用針頭吸取下層孢子液2-3毫升，再吸無水菌2-3毫升，把孢子進(jìn)一步稀釋，接著把培養(yǎng)基試管棉基輕輕拔松，把針頭從試管壁處插入輕按針筒，注射1-2滴孢子液。順培養(yǎng)基試管流入斜面，注射后，塞上棉塞，放入23-25℃恒溫下培養(yǎng)，并經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)雜菌感染要立即拿出，一般培養(yǎng)9-12天后，就能看見散發(fā)的菌絲。

(四)分離和培養(yǎng)母種:

平菇孢子萌發(fā)后，可從綠豆大小菌絲中挑選出菌絲濃壯整齊白色，生勢強(qiáng)的單個(gè)菌落移植到另外的試管中間，挑孢子時(shí)，培養(yǎng)基要挑的薄，否則接種塊發(fā)黃衰老。接種后的試管放在20-22℃下培養(yǎng)，溫度逐漸降低，才能促使菌絲健壯，當(dāng)菌絲長到蠶豆大小時(shí)，溫度降到14-16℃，菌絲長到斜面的一半時(shí)，溫度下降到12-14℃經(jīng)過逐漸降溫，培養(yǎng)出來的母種，菌絲粗短、潔白、整齊，生活力強(qiáng)。當(dāng)菌絲快要長滿斜面時(shí)，就挑選生長最優(yōu)良的，移殖到新的試管中，每支試管可接30-50支，一般擴(kuò)接2-3次。

在培養(yǎng)期間，培養(yǎng)室一定要空氣新鮮，空氣相對濕度70%以下為宜。

(五)組織分離法:

選取肥厚，菌柄短而粗，無病蟲害的種菇，在無菌箱內(nèi)，用75%的酒精進(jìn)行表面消毒后，用消過毒的小刀在菌蓋中央縱切開一條縫，用手掰開，用接種針在菌柄和菌蓋的交接處，取豆粒大小的菌絲體組織，接人試管內(nèi)，放入20 -25℃的溫度下培養(yǎng)，一般培養(yǎng)20天后，菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基表面，即可用于擴(kuò)大培養(yǎng)。

二、原種擴(kuò)大培養(yǎng):

1、配方:

棉籽殼 100斤 木屑 100斤 玉米芯 100斤

石膏粉 2斤 石膏粉 2.5斤 石膏粉 2.5斤

A白糖1.3斤 B白糖1.3斤C白糖 1.3斤

磷酸二氫鉀0.5斤 磷酸二氫鉀0.5斤 磷酸二氫鉀0.7斤

水 130斤 140斤 水140-150斤

2拌料:和銀耳原種的拌料方法一樣。

3、裝瓶滅菌:培養(yǎng)料混合均勻后，馬上裝瓶，邊裝邊壓把瓶裝滿后，用一個(gè)上粗1.5厘米下粗1厘米的小木棒在瓶中間打一洞穴到瓶底或接近瓶底。塞上棉塞,進(jìn)行滅菌，在1.4公斤/厘米2壓力下保持2小時(shí)。然后取出培養(yǎng)基，冷卻后備用。

4、接種:選出已培養(yǎng)成熟的平菇母種試管和接種工具和原種培養(yǎng)基一同放入接種箱內(nèi)，進(jìn)行汽化消毒30分鐘后，進(jìn)行工作，左手拿住母種試管，右手的母指、中指和食指夾住接種針，在酒精燈上方，把棉基拔掉，用接種針在斜面試管中央分開，再用接種針把菌絲和培養(yǎng)基分開，挑取放入培養(yǎng)基瓶中間，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，一支試管可擴(kuò)原種1-2瓶。

5、培養(yǎng):原種接好以后，放入20-22℃溫度下培養(yǎng)，8-5天后把溫度降到18-20℃待菌絲長到底后，即可作為生產(chǎn)種的擴(kuò)大。在整個(gè)過程中，空氣相對混度70%以下室內(nèi)要保持干燥衛(wèi)生。

三、生產(chǎn)種的培育

1、培養(yǎng)基的成分與制作

棉籽殼 100斤 鋸木屑100斤

白糖 1.4斤 白糖 1. 4斤

石膏粉 2.5斤 石膏粉 2.5斤

硫酸鎂0.25斤 硫酸鎂0.2 5斤

磷酸二氫鉀0.25斤 磷酸二氫鉀0。25斤

制作方法與原種培養(yǎng)基相同，把料充分拌勻。

2、裝瓶和滅菌:把料裝入廣口瓶或罐頭瓶內(nèi)，邊裝邊壓，中間打洞，上邊用牛皮紙包上放入常壓鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌，在100℃時(shí)保持10個(gè)小時(shí)即可達(dá)到滅菌的目的滅菌結(jié)束后，把培養(yǎng)基取出，放到消過毒的地板上進(jìn)行冷卻30℃以下就可以接種。

3 、接種:取滅好菌的培養(yǎng)基和成熟的原種，工具一齊放在接種箱內(nèi)，進(jìn)行氣化消毒，30分鐘后，開始工作，用接種鏟，把上邊的1厘米去掉，取蠶頭大小一塊接另一培養(yǎng)基中央，按此法作完所有的培養(yǎng)基。放入20-25℃的溫度下培養(yǎng)，經(jīng)20-30天，培養(yǎng)的菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基，即可用于生產(chǎn)上。

第七章 猴頭菌種的制作與培養(yǎng)

一、母種(斜面試管)

A培養(yǎng)基的制作:馬鈴薯200克葡萄糖20克瓊脂20克木屑500克(闊葉樹)麥皮250克水1000毫升先把木屑500克麥皮250克放入干凈的鋼精鍋內(nèi)加水1000毫升，煮沸30分鐘用8層紗布過濾取汁，濾汁加水1000毫升把馬鈴薯去皮挖芽眼切片放入鍋內(nèi)煮沸約20分鐘再用4層紗布過濾取汁，補(bǔ)水到1000毫升，再將葡萄糖瓊脂加入加熱，待其全部溶化，趁熱分裝試管內(nèi)每管裝量為管的一，每七支捆成一捆，用牛皮紙包好，放于

鍋內(nèi)滅菌，在壓力上升到1.4公斤/厘米2時(shí),保持30分鐘，出鍋后擺成斜面。冷卻后，將斜面放置25-30℃的條件下培養(yǎng)1-2天，檢查是否有紅、綠、黃、黑色出現(xiàn),有重復(fù)滅菌，無即可接種。

B菌種的分離:

1、組織分離法:首先選擇球大，七、八成熟，顏色米黃色，用無菌刀刮去猴刺，放入無菌箱，用75%酒精進(jìn)行表面消毒，然后將子實(shí)體撕成兩半，用滅過菌的鑷子或接種針挑取球心組織一小塊(麥粒大小)迅速放入科面培養(yǎng)基的中央塞上棉塞。

2、孢子分離法:在接種箱內(nèi)，用接種針挑取1-2根猴毛，貼在試管內(nèi)斜面上方的瓶壁上，切勿觸及培養(yǎng)基，然后塞上棉塞。

注意:接種箱使用前要嚴(yán)格消毒滅菌，在開紫外線燈的同時(shí)，還要用米高錳酸鉀8克，甲醛每米*10毫升混合汽化，80分鐘后開始工作，工作前用75%的酒精擦手，工具要在火焰上方烤。菌種分離后，放于22-25℃的溫度下培養(yǎng)3-4天，有白色菌絲長出，發(fā)現(xiàn)雜菌，及時(shí)清理，菌絲布滿全管即是成熟(大約15-18天)。

無論用擴(kuò)大母種和原種均要幼令的菌種，即菌絲尚未長滿斜面生長處于高峰期的菌種。

二、原種培育:

原料配方:木屑玉米芯或棉籽殼100斤 麥皮10斤石膏粉1斤 白糖1斤 加水130斤。

拌料后裝入罐頭瓶內(nèi)，每瓶大約裝干料四兩，用薄膜包嚴(yán)扎緊，進(jìn)行滅菌100℃時(shí)保持8-10小時(shí)冷卻后即可接種一只試管母種可接原種5-10瓶(把試管母種分割成5-10塊)每瓶挑入一塊，放入25℃的條件培養(yǎng)20-25天左右，菌絲即可長到底。即告成熟再按原種培育法，即可獲得栽培種每瓶原種可擴(kuò)接50-60瓶生產(chǎn)種。

第八章 黑木耳的制種與培養(yǎng)

一、母種(斜面試管) A、培養(yǎng)基的制作:

①同第四章

②麥皮 100克

蔗糖 20克

硫酸鎂 3克

瓊脂 20克

水1000毫升

制法:稱取新鮮麥皮100克，加水煮沸20分鐘，用6層紗布過濾取汁，加入剪碎瓊脂，用文火煮至瓊脂全部溶化后，再加水至足量，并加入蔗糖和硫酸鎂，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，?層紗布再過濾一次，趁熱分裝于試管中，裝量為試管長度的一，塞好棉塞。每十支綁成一捆，用牛皮紙包扎棉塞端。放于高壓鍋內(nèi)滅菌,在1.1公斤/厘米2壓力下保持30分鐘，出鍋后擺成斜面，冷卻凝固后，將斜面放置25-30℃的條件下培養(yǎng)1-2天。檢查是否有黃、綠、黑、紅顏色出現(xiàn)。有，重復(fù)滅菌;無，即可用于接種。

B、菌種的分離:

1、組織分離法:選擇耳片舒展、肉質(zhì)肥厚，耳大的一朵木耳，(在七、八成熟時(shí)采下)，置入接種箱內(nèi)，先用75%酒精泡1分鐘，然后分別在無菌水里洗2-3遍，再用無菌紗布吸干表面上的無菌水，用剪刀剪取黃豆大的耳片與斜面培養(yǎng)基的中間，放人24-26℃溫度進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

2、孢子分離法:在接種箱內(nèi)，把消毒后的種耳同銀耳。懸掛法用鋼鉤掛入裝有滅好菌具有3毫米深的培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，塞上棉塞，放入23-25℃溫度下培養(yǎng)1-2天左右，在種耳表面上看到有白色，糊狀的孢子。再在無菌箱內(nèi)把鋼鉤和種耳去掉，在22-25℃溫度下，培養(yǎng)5-7天后，用接種針在接種箱內(nèi)，挑取一點(diǎn)放入斜面培養(yǎng)基中間，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

C母種培養(yǎng):

菌種分離后，放于23-25℃的溫度下，培養(yǎng)3-4天可以看到有白色菌絲長出，發(fā)現(xiàn) 紅、綠、黑、黃 及時(shí) 陶

汰。隨后菌絲逐漸增加，一般15-18天左右，菌絲即可布滿整個(gè)培養(yǎng)基表面。再馬上轉(zhuǎn)入移管培養(yǎng)，進(jìn)一步提純，一般經(jīng)過2-3次提純，即可用于原種擴(kuò)接。

二、原種擴(kuò)大培養(yǎng);

1、培養(yǎng)基制取:

成份:棉籽殼或木屑100斤

石膏粉 2.5斤

白糖 1.3斤

硫酸鎂 0.2 5斤

120-140斤

制作:稱取木屑或棉籽殼、石膏粉適量使之混合均勻,然后把白糖、硫酸鎂用開水化開，記下數(shù)量，再稱去涼水?dāng)?shù)量(總水減開水?dāng)?shù))使整個(gè)混合水充分混合均勻，倒入干培養(yǎng)料中，攪拌均勻。

2、裝瓶、滅菌:

培養(yǎng)料拌好后，馬上裝入750毫升的廣口瓶中，邊裝邊壓，裝滿后在瓶中間打一個(gè)洞穴，到底或接近到底，然后用牛皮紙或棉塞把口封好，放入高壓滅菌鍋進(jìn)行高溫消毒,在1.4公斤/厘米*壓力下，保持2小時(shí)，取出培養(yǎng)基放在消好毒的地板上，使之冷卻。

3、接種:選擇已培養(yǎng)成熟的黑木耳母種試管和接種工具，連同已滅菌原種培養(yǎng)基一起移入接種箱內(nèi)進(jìn)行汽化消毒30分鐘。用接種針挑取斜面培養(yǎng)基的菌絲(可少帶瓊脂)與培養(yǎng)基表面，塞上棉塞，放入24-26℃溫度下培養(yǎng)。每支試管母種可接1-2瓶原種。

4、培養(yǎng):原種接好后，放入24-26℃溫度下，培養(yǎng)2-8天后，在接種塊看到有白色菌絲在萌發(fā);7天后，菌絲從菌種表面下伸2-3厘米，這時(shí)要經(jīng)常檢查發(fā)現(xiàn)雜菌感染及時(shí)清除，保持室內(nèi)空氣新鮮，空氣相對濕度在70%以下。一般經(jīng)20-30天恒溫培養(yǎng)菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)料，即可用于擴(kuò)大生產(chǎn)種。

三、生產(chǎn)種擴(kuò)大:

1、培養(yǎng)基成份:

棉籽殼或鋸木屑100斤

白糖 1。4斤

石膏粉 2.7斤0

硫酸鎂 0.3斤

磷酸二氫鉀 0.3斤

120-140斤

制法與原種相同。

2、裝瓶滅菌:

培養(yǎng)基拌好后，可以裝入罐頭瓶中，裝好后在瓶中間也打洞穴，用牛皮紙或塑料薄膜把口扎好，放入常壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行高溫消毒，在100℃溫度下保持10個(gè)小時(shí)，然后取出培養(yǎng)基，放入消好毒的地板上，冷卻后備用。

3、接種、培養(yǎng):把黑木耳原種、接種工具、已滅菌的生產(chǎn)種、培養(yǎng)基移入接種箱內(nèi)，汽化消毒30-40分鐘。用接種鏟在菌種表面輕刮1厘米，然后在酒精燈火焰區(qū)用接種鏟取蠶豆大小的菌種，放入培養(yǎng)基中間。用此法把瓶內(nèi)菌種全部接完。移入24-26℃溫度下培養(yǎng)，一般20-30天菌絲全部到底，(培養(yǎng)方法同原種培養(yǎng))即可用于擴(kuò)大生產(chǎn)。每瓶原種可擴(kuò)接50-60瓶生產(chǎn)種。