1、收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔參入100ul，鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）。

⒉、5%CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底（96孔平底板），參入濃度梯度的**，原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，但我們常在前**下午鋪板，次日上午加藥.一般5-7個梯度，每孔100ul，設(shè)3-5個復(fù)孔.建議設(shè)5個，否則難以反應(yīng)真實情況

⒊、5%CO2，37℃孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。

4、每孔參入20ulMTT試劑溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。若**與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，再參入含MTT的培養(yǎng)液。

5、終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。

6、每孔參入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)**檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。

7、同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的**溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）