| 研究背景與目的:目前研究表明肝癌預(yù)后在一定程度上與肝癌細(xì)胞在缺氧微環(huán)境中生物學(xué)行為的改變密切相關(guān)。而缺氧微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)通過(guò)表達(dá)抑制性配體和分泌趨化因子對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲、免疫逃逸等方面具有重要作用。本研究通過(guò)深入探討肝癌缺氧微環(huán)境中TREM-1調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)的具體機(jī)制,進(jìn)一步明確TREM-1+TAMs在肝癌免疫微環(huán)境中的作用;旨在指導(dǎo)臨床制定和優(yōu)化肝癌免疫治療策略。研究方法:1、臨床樣本組織染色區(qū)分肝癌實(shí)質(zhì)與間質(zhì)缺氧程度,在肝癌缺氧組織區(qū)域確定TREM-1+TAMs定位,分布及浸潤(rùn)情況;觀察TREM-1+TAMs周邊浸潤(rùn)帶,區(qū)域免疫細(xì)胞CD8+T細(xì)胞與FOXP3+Tregs的分布;同時(shí)評(píng)估腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)與患者生存預(yù)后關(guān)系;2、模擬體外肝癌缺氧微環(huán)境,利用雙熒光酶素雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HIF-lα與TREM-1的調(diào)控關(guān)系3、構(gòu)建TREM-1+巨噬細(xì)胞小鼠荷瘤模型,利用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)研究腫瘤內(nèi)部CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)答功能和凋亡狀態(tài),檢測(cè)TAMs抑制性配體PD-L1表達(dá)水平。4、流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)和蛋白印跡法檢測(cè)TREM-1+TAMs趨化Tregs的相關(guān)機(jī)制。研究結(jié)果:1、TREM-1+TAMs廣泛存在于肝癌缺氧微環(huán)境中并提示不良預(yù)后;2、HIF-lα誘導(dǎo)的TREM-1+TAMs能促進(jìn)CD8+T細(xì)胞失功與免疫抑制,TAMs有高水平PD-L1表達(dá);3、腫瘤內(nèi)部的FOXP3+Treg一定程度上依賴于TREM-1+TAMs的積累,通過(guò)ERK/NF-Kβ/CCL20信號(hào)通路完成招募。結(jié)論:肝癌預(yù)后在一定程度上與肝癌細(xì)胞在缺氧微環(huán)境中生物學(xué)行為的改變密切相關(guān)。本項(xiàng)目首次闡明了缺氧微環(huán)境作為始動(dòng)因素,通過(guò)上調(diào)TAMs關(guān)鍵免疫受體TREM-1,高表達(dá)抑制性配體PD-L1,同時(shí)招募FOXP3+Tregs介導(dǎo)肝癌抑制性免疫微環(huán)境的形成。TREM-1+TAMs有望成為治 療肝癌潛在靶點(diǎn)指導(dǎo)臨床治療策略。 |
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