根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)合成sgRNA，針對(duì)Knockin插入點(diǎn)或點(diǎn)突變位置構(gòu)建含Knockin片段或點(diǎn)突變的同源序列，與Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞質(zhì)，Cas9核酸酶、sgRNA、基因組靶序列結(jié)合并切割雙鏈DNA，以含Knockin的同源序列為模版修復(fù)基因組DNA，最終獲得在目的DNA序列插入Knockin片段或點(diǎn)突變的Knockin小鼠。

根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)合成兩個(gè)sgRNA，分別針對(duì)兩個(gè)Loxp的插入點(diǎn)，構(gòu)建含Loxp的同源序列，與Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞質(zhì)，Cas9核糖酶、sgRNA、基因組靶序列結(jié)合并切割雙鏈DNA，以含Loxp同源序列為模板修復(fù)基因組DNA，最終獲得在待敲除目的DNA序列兩端各有一個(gè)Loxp序列的Flox小鼠。