實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)以懸液定量試驗(yàn)為主,試驗(yàn)應(yīng)重復(fù)3次。
消毒劑試驗(yàn)濃度應(yīng)用產(chǎn)品說(shuō)明書規(guī)定的該消毒劑對(duì)某一有代表性消毒對(duì)象的最低使用濃度。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)不同作用時(shí)間，原則上第一時(shí)間為說(shuō)明書規(guī)定的最短作用時(shí)間的0.5倍,第二時(shí)間為最短作用時(shí)間,第三時(shí)間為最短作用時(shí)間的1.5倍。
關(guān)于重復(fù)性的要求：不是只在同次試驗(yàn)中增加菌片數(shù),或多作幾份樣本,而是應(yīng)分期分批進(jìn)行。必要的器材和試劑應(yīng)重新制備或滅菌,以防產(chǎn)生系統(tǒng)性誤差。
殺菌效果合格標(biāo)準(zhǔn)
a)去除殘留消毒劑效果的鑒定試驗(yàn)合格。
b)消毒產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果符合下列指標(biāo)要求：
1)懸液定量殺菌試驗(yàn)時(shí)，每次試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌繁殖體和細(xì)菌芽胞如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅對(duì)數(shù)值大于或等于5.00,對(duì)白色念珠菌和黑曲霉菌的殺滅對(duì)數(shù)值大于或等于4.00。對(duì)照組微生物數(shù)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
2)載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)時(shí),每次試驗(yàn)對(duì)各類微生物的殺滅對(duì)數(shù)值或滅活對(duì)數(shù)值大于或等于3.00,對(duì)照組微生物數(shù)在規(guī)定的范圍內(nèi)。載體浸泡定性滅菌試驗(yàn)時(shí),各次試驗(yàn)所有載體.均無(wú)試驗(yàn)菌生長(zhǎng),對(duì)照組微生物數(shù)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
實(shí)驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌ATCC 6538、銅綠假單胞菌ATCC15442、 大腸桿菌8099、枯草桿菌黑色變種芽胞ATCC9372、白色葡萄球菌8032。在上述規(guī)定的菌株基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗(yàn)特殊需要,還可增選其他菌株。
詳細(xì)給出了細(xì)菌懸液制備程序
細(xì)菌繁殖體懸液應(yīng)保存在4 ℃冰箱內(nèi)備用。應(yīng)當(dāng)天使用,不得過(guò)夜。
懷疑有污染時(shí),應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色與生化試驗(yàn)等法進(jìn)行鑒定。
給出了詳細(xì)的細(xì)菌芽胞懸液的制備方法
制備好的細(xì)菌芽孢懸液要求保存于4 ℃冰箱中備用。有效使用期半年。
芽胞懸液在使用時(shí),應(yīng)先進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
懷疑有雜菌污染時(shí),應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色與生化試驗(yàn)等方法進(jìn)行鑒定。
給出了詳細(xì)的菌片(染菌載體)的制備程序
所用載體(除濾紙片外)于染菌前,應(yīng)進(jìn)行脫脂處理。脫脂過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照如下步驟進(jìn)行:
a)將載體放在含洗滌劑的水中煮沸30min;
b) 以自來(lái)水洗凈;
c) 用蒸餾水煮沸10 min;
d) 用蒸餾水漂洗至pH呈中性;
e)晾干、熨平備用。
要求菌片(載體)的回收菌量應(yīng)為1X10^6 CFU/片~5X10^6CFU/片。
保存菌液的容器使用橡皮塞時(shí),應(yīng)將其預(yù)先煮沸10min進(jìn)行脫硫處理。
給出了活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)技術(shù)的詳細(xì)步驟和方法
給出了殘留消毒劑(化學(xué)因子)的去除方法
（1）稀釋中和法(中和劑法)
（2）過(guò)濾沖洗法
關(guān)于中和劑鑒定試驗(yàn)：
同一消毒劑對(duì)多種微生物進(jìn)行殺滅試驗(yàn)時(shí),所用中和劑應(yīng)按微生物種類分別進(jìn)行鑒定試驗(yàn):
對(duì)細(xì)菌繁殖體,一般在大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌中任選其一進(jìn)行試驗(yàn),特殊情況按試驗(yàn)結(jié)果再行選擇;
對(duì)細(xì)菌芽胞、白色念珠菌、黑曲霉菌、分枝桿菌應(yīng)分別進(jìn)行鑒定試驗(yàn);
當(dāng)用其他特定微生物進(jìn)行殺滅試驗(yàn)時(shí),均應(yīng)以該特定微生物進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。
中和劑鑒定試驗(yàn)的分組應(yīng)為：
a)第1組:中和劑+菌懸液;
b) 第2組:(消毒劑+中和劑)+菌懸液;
c) 第3組:稀釋液+菌懸液;
d) 第4組:稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)室要求：應(yīng)在生物安全I(xiàn)I級(jí)以上的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行,并符合GB19489中的相關(guān)要求。
每吸取一次不同樣液應(yīng)更換無(wú)菌吸管，接種環(huán)(針)應(yīng)在火焰上燒灼滅菌后,才可再次使用,也可用一次性使用的無(wú)菌吸管和接種環(huán)(針)。
要求無(wú)菌的試劑,如蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)硬水、中和劑等,均應(yīng)滅菌。
