腺瘤性息肉（APC）基因在結(jié)直腸癌發(fā)病的過程中起著重要的作用，但是針對其開發(fā)相應(yīng)藥物仍舊困難重重。長鏈非編碼RNA是長度大于 200個核苷酸的非編碼 RNA,是研究熱點之一，在癌癥的診斷治療方面具有重要價值。

中山大學(xué)謝丹教授團(tuán)隊結(jié)合了這兩者，近期在JCI上發(fā)表了名為“APC-activated long non-coding RNA inhibits colorectal carcinoma pathogenesis through reducing exosome production”的長文。他們通過對大量的結(jié)直腸癌（CRC）標(biāo)本進(jìn)行LncRNA微陣列分析，篩選并鑒定了出一個由APC基因激活的LncRNA（LncRNA-APC1）。LncRNA－APC1在預(yù)后不良的CRC患者表達(dá)降低，與淋巴結(jié)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。APC可抑制LncRNA－APC1的啟動子區(qū)PPARα的富集，從而減少LncRNA－APC1表達(dá)。此外，LncRNA－APC1通過直接結(jié)合Rab5b mRNA，降低其穩(wěn)定性來減少外泌體的產(chǎn)生，這可直接抑制CRC癌細(xì)胞的增殖，轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成。LncRNA－APC1敲除的CRC細(xì)胞來源的外泌體可激活內(nèi)皮細(xì)胞MAPK通路促進(jìn)血管生成?？偠灾?，LncRNA－APC1是APC調(diào)節(jié)CRC的關(guān)鍵性LncRNA。這些結(jié)果都提示LncRNA－APC1可作為未來可以去探索的治療CRC的位點之一。

Figure 1：將SW480/DLD-1過表達(dá)APC基因后進(jìn)行l(wèi)ncRNA芯片測試，q-PCR驗證可能受APC調(diào)控的lncRNA，從而篩選出lncRNA-APC1，發(fā)現(xiàn)lncRNA-APC1表達(dá)量高的CRC病人存活時間久。

Figure 2：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灪虲HIP實驗驗證了APC調(diào)控的lncRNA-APC1表達(dá)量高，部分原因是由于PPARα與lncRNA-APC1啟動子區(qū)的結(jié)合。

Figure 3：無論是體內(nèi)（肺部、肝部、脾臟轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)）還是體外（CCK8），過表達(dá)lncRNA-APC1后，癌細(xì)胞生長受到了抑制，lncRNA-APC1對CRC腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移具有抑制作用。

Figure 4：當(dāng)作者WT APC和APC以及WT APC+敲減lncRNA-APC1的細(xì)胞來成瘤時，發(fā)現(xiàn)敲減lncRNA-APC1可以部分逆轉(zhuǎn)改變APC的影響，證明APC的功能部分依賴于lncRNA-APC1。

Figure 5：那么lncRNA-APC1到底如何抑制癌細(xì)胞生長呢？作者們發(fā)現(xiàn)lncRNA-APC1的表達(dá)導(dǎo)致腫瘤組織明顯壞死，而β-catenin和 c-Myc沒有任何變化。作者們還發(fā)現(xiàn)過表達(dá)lncRNA-APC1后微血管明顯減少，說明lncRNA-APC1通過抑制腫瘤血管生成抑制CRC細(xì)胞腫瘤生長。

Figure 6：那么lncRNA-APC1是否會影響血管生成的某些重要基因的表達(dá)，如：VEGFA, EGF, PDECFG, ANG1, ANG2, and TGF-β1等，但結(jié)果并無差異。lncRNA-APC1過表達(dá)細(xì)胞外泌體量明顯減少，證明lncRNA-APC1可以減少癌細(xì)胞內(nèi)外泌體的含量。

Figure 7：作者想驗證lncRNA-APC1是否真的通過外泌體來抑制血管生成。lncRNA-APC1過表達(dá)細(xì)胞株收取上清中外泌體，加入至HUVECs，發(fā)現(xiàn)微管形成減少。lncRNA-APC1敲減的HCT116上清中的外泌體職能剛好相反。

Figure 8：lncRNA-APC1通過Rab5b減少CRC外泌體的產(chǎn)生。q-PCR和WB顯示lncRNA-APC1高表達(dá)時，Rab5b表達(dá)量減少。當(dāng)用敲除Rab5b的細(xì)胞系建模時，腫瘤大小明顯減小。

Figure 9：沉默或者敲低lncRNA-APC1 / Rab5b后的CCK8和Transwell實驗證實了lncRNA-APC1沉默可通過Rab5b促進(jìn)CRC細(xì)胞的增殖和遷移。

Figure 10：通過生信分析器，Rab5b mRNA 和lncRNA-APC1具有潛在的結(jié)合位點，RIP 實驗證實了lncRNA-APC1可與Rab5b mRNA相互作用，降低其在CRC中的穩(wěn)定性。

Figure 11：Western blot檢測顯示，來自lncRNA-APC1的外泌體沉默后激活HUVECs中的MAPK通路，毛細(xì)管形成和Tranwell侵入試驗都驗證外泌體通過激活內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)MAPK通路促進(jìn)腫瘤血管生成

Figure 12：WB顯示CRC來源外泌體富含Wnt1，而干擾Wnt1后lncRNA-APC1并無改變，體外Wnt1缺失的細(xì)胞來源外泌體，促進(jìn)腫瘤生長的功能減弱，但是t細(xì)胞因子/淋巴樣增強因子(TCF/LEF)水平并無明顯差異，這說明外泌體Wnt1可能通過非經(jīng)典Wnt信號通路促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖和遷移。

如上圖：本報告首次明確lncRNA-APC1是APC功能的重要中介，通過直接調(diào)控Rab5B mRNA的穩(wěn)定性，從而降低CRC細(xì)胞外泌體的產(chǎn)生。此外，研究結(jié)果顯示,CR來源的外泌體通過lncRNA-APC1 / Rab5b軸強有力地影響CRC發(fā)病機理和/或血管生成，而APC信號也可以獨立于β-catenin和經(jīng)典的Wnt信號通路發(fā)揮其作用。

參考文獻(xiàn)：Wang FW, Cao CH, Han K, Zhao YX, Cai MY, Xiang ZC, Zhang JX, Chen JW, Zhong LP, Huang Y et al: APC-activated long non-coding RNA inhibits colorectal carcinoma pathogenesis through reducing exosome production. The Journal of clinical investigation 2018.

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