首先，讓我們來了解下GC-MS的相關(guān)介紹~

GC-MS分離檢測的原理：利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等理化性質(zhì)的不同來進行分離，然后進入質(zhì)譜檢測器進行檢測的過程。

GC-MS儀器分為三個系統(tǒng)：進樣系統(tǒng)；分離系統(tǒng)；檢測系統(tǒng)。

GC-MS的適用范圍：主要取決于化合物的性能，一般適用于分子量小、易揮發(fā)的代謝物，詳情如下圖:

接下來，我們通過如下圖片來看一下GC-MS靶向定量方法基本流程：

那我們再來了解靶向定量方法流程重點介紹；首先，我們來看看代謝物提取的一些注意事項：

除了代謝物的提取，代謝物的純化與富集也是非常重要的；那么純化和富集的目的是什么呢?純化主要是為了去除蛋白質(zhì)、核酸、鹽或者干擾目標代謝物檢測的其他代謝物；富集的目的主要是提高待測物質(zhì)的靈敏度和檢測限。具體步驟我們也通過下面的圖片了解一下：

再來看下建GC-MS方法中非常關(guān)鍵的一個點：衍生化

接下來，再看下代謝物定量方法；定量方法主要分2種：外標法和內(nèi)標法，其中外標法是比較常用的定量方法。

外標法（常用）：用待測組分的標準品作對照物質(zhì)，將對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應信號相比較進行定量的方法，也稱為標準曲線法，是一種絕對定量的方法。

內(nèi)標法：是一種間接或相對的校準方法，在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內(nèi)標物質(zhì)，以校準和消除由于操作條件、儀器波動對分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，可提高分析結(jié)果的準確度。

內(nèi)標物的選擇：

01.理化性質(zhì)與待測物相近

02.在樣品中不存在且不與樣品中組分發(fā)生化學反應

03.不與儀器設(shè)備（色譜柱）發(fā)生反應

04.目標物的同位素標記物是最常用的內(nèi)標物質(zhì)

05.外源類似物

方法學驗證是對測定方法的評價,是建立新方法的研究內(nèi)容和依據(jù)；主要給大家介紹4點：靈敏度、精密度、準確度、線性

靈敏度

靈敏度：包括檢出限和定量限

01.檢出限（The Limit of Detection，LOD）:指檢測方法在規(guī)定的實驗條件下能檢出分析物的最低濃度（信噪比s/n≥3）；

02.定量限（The Limit of Quantitation，LOQ）:指檢測方法在規(guī)定的實驗條件下能定量分析物的最低濃度（信噪比s/n≥10）；

準確度

準確度：實際值與計量值之間的偏差，可以用加標回收率表示。

01.準確度=（測量值/真實值）×100%;

02.加標濃度(4個加標濃度水平):定量下限加標,低濃度加標,中濃度加標,高濃度加標，每一濃度5個測試樣；

03.要求準確度偏差在±15%以內(nèi)，定量下限在±20%內(nèi)；

精密度

精密度是指同一均勻樣品在相同條件，N次重復測定結(jié)果彼此符合的程度。它們越接近就越精密，常用RSD表示精密度。

精密度：考察儀器方法和穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，包括日內(nèi)精密度和日間精密度。

線性

線性：在外標法繪制標準曲線時需要考察線性相關(guān)性。

01.線性相關(guān)系數(shù)大于0.995。

02.通常校正標樣需要5-7個有效點，且準確度需要滿足80%-120%。

最后，小鹿給大家總結(jié)下本篇內(nèi)容：本次干貨主要分享的是如何建立基于GCMS靶向代謝組學方法。有更多不同觀點，歡迎留言交流討論哦~