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高效化學同位素標記液相色譜質譜法用于外泌體代謝組學分析

 昵稱61345655 2018-12-26

前言

2018年12月,由中國抗癌協(xié)會腫瘤標志專業(yè)委員會外泌體技術專家委員會主任委員、暨南大學張灝教授領銜的專家團隊執(zhí)筆撰寫的《外泌體研究、轉化和臨床應用專家共識》,正式在線發(fā)表于《轉化醫(yī)學雜志》。這是中國國內權威發(fā)布的第一個外泌體研究臨床轉化的專家共識。

共識摘要

由于外泌體在腫瘤等疾病的基礎研究、轉化應用和診斷治療中展現(xiàn)出的巨大潛力而備受矚目。在發(fā)展精準醫(yī)療產(chǎn)業(yè)的背景下,如何建立相關領域的標準與規(guī)范,促進產(chǎn)學研結合,理性引導技術轉化,需要來自于基礎科研、臨床、檢驗等領域的專家,以及監(jiān)管部門的多方參與合作。為推動和促進國內外泌體特別是外泌體腫瘤標志物的研究和轉化應用的有序開展,中國抗癌協(xié)會腫瘤標志專業(yè)委員會外泌體技術專家委員會組織專家撰寫了外泌體研究、轉化和臨床應用專家共識。在本共識中,就外泌體研究領域的發(fā)展歷程與現(xiàn)狀闡述了觀點及立場,并對外泌體研究的未來方向進行了展望。

關于外泌體

外泌體(exosomes)是一種能被機體內大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜,直徑大約為 30-150 nm。外泌體廣泛存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關。

下面的文章就介紹了一種關于外泌體研究新研發(fā)的高靈敏度檢測方法和分析流程。

高效化學同位素標記液相色譜質譜法用于外泌體代謝組學分析

基本信息

材料:人血清

主要技術LC-MS全代謝組

期刊Anal. Chem.

影響因子:6.042

文章摘要

在體液(如血清)中的循環(huán)外泌體作為癌癥診斷和監(jiān)測的化學生物標志物正在被積極關注。盡管核酸分析是發(fā)現(xiàn)外泌體中生物標志物的主要工具,但代謝組學具有簡易且快速檢測的優(yōu)勢,因此有擴展生物標志物的化學多樣性的潛力。然而只能從患者少量血液中分離出痕量的外泌體,因此需要開發(fā)非常靈敏的外泌體的代謝組學分析技術。


研究團隊發(fā)展了一個代謝分析流程,包括多重超速離心循環(huán),2 mL人血清在50%甲醇/水的凍融體用于外泌體破碎和代謝物提取,被差異化學同位素標記(CIL)的代謝物用于改進液相色譜(LC)分離和質譜(MS)檢測靈敏度,帶有captivespray電噴霧離子源的納流液相色譜-質譜(nLC-MS)用于代謝物分析。


作為方法驗證,文章使用丹磺酰標記法分析了兩組血液外泌體樣本中的氨基和酚基代謝物,這兩組樣本分別來自化療前后的五個胰腺癌病人。第一組樣本總共檢測到2446個峰或代謝物(n = 10),每個樣品平均1964±60個峰;第二組樣本總共檢測到2511個峰(n = 10),平均每個樣品1948±117個。 在第一組和第二組中分別定性出101和94個代謝物,以及在My Compound ID代謝組數(shù)據(jù)庫能與代謝物的精確質量數(shù)匹配的峰數(shù)量分別為1580和1590。將作為內標的13C-標記的樣本與12C標記的外泌體樣品混合并分析,并對處理前后血液樣品外泌體的代謝組變化進行相對定量。

方法流程

實驗總流程圖

樣本處理和分析過程

被檢測到的代謝物

聚類分析

小鹿點評

代謝組學的發(fā)展離不開新技術的創(chuàng)新,文章就介紹了一種新研發(fā)的高靈敏度檢測方法和分析流程,能定量檢測到血漿中微量外泌體中的痕量代謝物。該方法應用于臨床血液樣品分析,一次可以檢測到的代謝物多達1950個,通過聚類分析找到的差異代謝物有作為潛在生物標志物的潛力。

文獻來源

 Xian L. et al. High-performance chemical isotope labeling liquid chromatography mass spectrometry for exosome metabolomics. 2018, Analytical Chem.

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