《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》報批稿

1　范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了艾滋病和艾滋病病毒感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
    本標(biāo)準(zhǔn)適用于全國各級各類醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)及其工作人員對艾滋病和艾滋病病毒感染的診斷。

2　術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

2.1　艾滋病病毒，人免疫缺陷病毒　human immunodeficiency virus，簡稱HIV

是導(dǎo)致艾滋病的病原體。

2.2　艾滋病，獲得性免疫缺陷綜合征　acquired immunodeficiency syndrome，簡稱AIDS

是由HIV感染引起的，以人體CD4+T淋巴細胞減少為特征的進行性免疫功能缺陷，疾病后期可繼發(fā)各種機會性感染、惡性腫瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的綜合性疾患。

2.3　 HIV感染者  HIV infected person

感染HIV后尚未發(fā)展到艾滋病階段的個體。

2.4　艾滋病患者　AIDS patient

感染HIV后發(fā)展到艾滋病階段的患者。

2.5　CD4+T淋巴細胞　CD4+T lymphocyte

表達CD4分子的輔助性T淋巴細胞，是HIV感染的主要靶細胞。

2.6　 機會性感染　opportunistic infection

在免疫功能低下時發(fā)生的感染性疾病。

2.7　 HIV血清陽轉(zhuǎn)　HIV seroconversion

感染HIV后機體血清中的HIV抗體由無反應(yīng)轉(zhuǎn)為有反應(yīng)的過程。

2.8　 窗口期　window period

指從HIV感染人體到感染者血清中的HIV抗體、抗原或核酸等感染標(biāo)志物能被檢測出之前的時期。在窗口期內(nèi)的血液已有感染性?，F(xiàn)有診斷技術(shù)檢測HIV抗體、抗原和核酸的窗口期分別為感染后的3周、2周和1周左右。

2.9　 病毒載量　viral load

指患者血漿(清)中HIV RNA的數(shù)量，屬HIV核酸定量檢測的指標(biāo)，檢測結(jié)果用每毫升血漿(清) 中HIV RNA的拷貝數(shù)或國際單位來表示(CPs/mL或IUs/mL)。

2.10　HIV抗體篩查試驗　HIV antibodyscreening test

是一類初步了解機體血液或體液中有無HIV抗體的檢測方法，也包括同時檢測HIV抗體和抗原的方法。檢測得出HIV抗體或抗原有反應(yīng)或無反應(yīng)的結(jié)果。常用的檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗、免疫凝集試驗、免疫層析試驗、免疫滲濾試驗和抗原抗體聯(lián)合檢測試驗。

2.11　 HIV補充試驗　HIV supplementarytest

是在獲得篩查試驗結(jié)果后，為了準(zhǔn)確判斷，繼續(xù)檢測機體血液或體液中有無HIV抗體或核酸的方法，包括抗體確證試驗和核酸試驗。抗體確證試驗包括免疫印跡試驗、條帶/線性免疫試驗、免疫層析試驗、免疫滲濾試驗及特定條件下的替代試驗，核酸試驗包括核酸定性試驗和核酸定量試驗。

2.12　 CD4+T淋巴細胞計數(shù) CD4 positiveT lymphocyte count

每立方毫米外周血中含有的CD4+T淋巴細胞的數(shù)量。

2.13　 CD4+T淋巴細胞百分比 CD4 positiveT lymphocyte percentage

    外周血中CD4+T淋巴細胞占總淋巴細胞的百分比，5歲及以下兒童適用。

2.14　職業(yè)暴露史　occupational exposure history

指從事艾滋病防治或可能接觸到艾滋病病原體工作的人員，工作時發(fā)生過與艾滋病病原體意外接觸的歷史。

2.15　醫(yī)源性暴露史　nosocomial exposure history

有過不安全注射、穿刺或手術(shù)史，或者有接受過未經(jīng)HIV檢測的血液、血制品、組織或器官的歷史。

3　縮略語

下列縮略語適用于本文件。

AIDS：艾滋?。╝cquiredimmunodeficiency syndrome）

CPs：拷貝數(shù)（copies）

HIV：人免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiency virus）

PGL：持續(xù)性全身性淋巴腺病（persistentgeneralized lymphadenopathy）

VL：病毒載量（viral load）

4　診斷依據(jù)

4.1　流行病學(xué)史

4.1.1　患有性病或有性病史。

4.1.2　有不安全性行為(包括同性和異性性接觸)。

4.1.3　有共用注射器吸毒史。

4.1.4　有醫(yī)源性暴露史。

4.1.5　有職業(yè)暴露史。

4.1.6　HIV/AIDS患者的配偶或性伴侶。

4.1.7　HIV/AIDS母親所生子女。

4.2　臨床表現(xiàn)(各類臨床表現(xiàn)參見附錄A)

4.2.1　急性HIV感染綜合征（參見A.1）。

4.2.2　PGL（參見A.2）。

4.2.3　免疫系統(tǒng)輕度缺陷時的臨床表現(xiàn)：

4.2.3.1　成人及15歲(含15歲)以上青少年

A組臨床表現(xiàn)（參見A.6.1）。

4.2.3.2　15歲以下兒童

D組臨床表現(xiàn)（參見A.7.1）。

4.2.4　免疫系統(tǒng)中度缺陷時的臨床表現(xiàn)：

4.2.4.1　成人及15歲(含15歲)以上青少年

B組臨床表現(xiàn)（參見A.6.2）.

4.2.4.2　15歲以下兒童

E組臨床表現(xiàn)（參見A.7.2）.

4.2.5　免疫系統(tǒng)重度缺陷時的臨床表現(xiàn)，為AIDS的指征性疾病，包括機會性感染、腫瘤和HIV相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀：

4.2.5.1　成人及15歲(含15歲)以上青少年

C組臨床表現(xiàn)（參見A.6.3 ）。

4.2.5.2　15歲以下兒童

F組臨床表現(xiàn)（參見A.7.3）。

4.3　實驗室檢測(各項HIV實驗室檢測技術(shù)具體說明，見附錄B)

4.3.1總則

因存在檢測的窗口期，實驗室檢測需根據(jù)情況綜合應(yīng)用抗體檢測、核酸檢測和HIV病毒分離試驗。

4.3.2　血清學(xué)檢測(見B.1)

4.3.2.1　HIV抗體篩查試驗

篩查試驗結(jié)果有反應(yīng)，提示HIV抗體可能陽性，需進一步做補充試驗予以證實。篩查試驗結(jié)果無反應(yīng)，報告HIV抗體陰性。

4.3.2.2　HIV抗體確證試驗

確證試驗結(jié)果陽性，報告HIV抗體陽性；確證試驗結(jié)果陰性，報告HIV抗體陰性；確證試驗結(jié)果不確定，報告HIV抗體不確定，并建議2周～4周后隨訪或盡快做HIV核酸檢測。

4.3.3　病原學(xué)檢測

4.3.3.1　HIV病毒分離試驗(見B.2)

試驗結(jié)果陽性報告HIV感染，陰性不能排除HIV感染。

4.3.3.2　HIV核酸檢測(見B.3)

核酸定性試驗結(jié)果陽性或定量試驗＞5 000 CPs/mL提示HIV感染，陰性不能排除HIV感染。

4.3.4　免疫學(xué)檢測(見B.4)

4.3.4.1 檢測分類：免疫學(xué)檢測是進行HIV感染和AIDS的分期、啟動治療和判斷療效的主要檢測指標(biāo)，主要采用CD4+T淋巴細胞檢測，分CD4+T淋巴細胞計數(shù)和百分比兩類。

4.3.4.2　CD4+T淋巴細胞計數(shù)

適用于成人及5歲以上兒童和青少年。該人群CD4+T淋巴細胞計數(shù)≥500/mm³，提示無免疫缺陷；350/mm³～499/mm³，提示輕度免疫缺陷；200/mm³～349/mm³，提示中度免疫缺陷；＜200/mm³，提示重度免疫缺陷。

4.3.4.3　CD4+T淋巴細胞百分比

適用于5歲及以下兒童。該人群CD4+T淋巴細胞在外周血T細胞中百分比＞35％(＜12月齡)，或＞30％(12月齡～36月齡)，或＞25％(37月齡～60月齡)，提示無免疫缺陷；30％～35％(＜12月齡)，或25％～30％(12月齡～36月齡)，或20％～25％(37月齡～60月齡)，提示輕度免疫缺陷；25％～29％(＜12月齡)，或20％～24％(12月齡～36月齡)，或l5％～l9％(37月齡～60月齡)，提示中度免疫缺陷；＜25％(＜12月齡)，或＜20％(12月齡～36月齡)或＜15％(37月齡～60月齡)，提示重度免疫缺陷。

5　診斷原則

HIV/AIDS的診斷原則是以實驗室檢測為依據(jù)，結(jié)合臨床表現(xiàn)和參考流行病學(xué)資料綜合進行。HIV抗體和病原學(xué)檢測是確診HIV感染的依據(jù)；流行病學(xué)史是診斷急性期和嬰幼兒HIV感染的重要參考；CD4+T淋巴細胞檢測和臨床表現(xiàn)是HIV感染分期診斷的主要依據(jù)；AIDS的指征性疾病是AIDS診斷的重要依據(jù)。

6　診斷

6.1　HIV感染

6.1.1　成人、青少年及18個月齡以上兒童

符合下列一項者即可診斷：

a)       HIV抗體篩查試驗有反應(yīng)和HIV抗體確證試驗陽性；

b)       HIV分離試驗陽性；

c)       HIV抗體篩查試驗有反應(yīng)和核酸定性試驗陽性；

d)       HIV抗體篩查試驗有反應(yīng)和核酸定量試驗大于5000 CPs/mL；

e)       有流行病學(xué)史或急性HIV感染綜合征，兩次HIV核酸檢測均為陽性（用于診斷急性HIV感染期）。

6.1.2　18個月齡及以下兒童

符合下列一項者即可診斷：

a)       為HIV感染母親所生和HIV分離試驗陽性；

b)       為HIV感染母親所生和兩次HIV核酸檢測均為陽性(第二次檢測需在出生4周后采樣進行)；

c)       有醫(yī)源性暴露史，HIV分離試驗結(jié)果陽性或兩次HIV核酸檢測均為陽性。

6.2　AIDS病例

6.2.1　成人及15歲(含15歲)以上青少年

符合下列一項者即可診斷：

a)       HIV感染和CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜200／mm³；

b)       HIV感染和伴有至少一種成人AIDS指征性疾病(參見附錄A.6.3)。

6.2.2　15歲以下兒童

符合下列一項者即可診斷：

a)       HIV感染和CD4+T淋巴細胞百分比＜25％(＜12月齡)、或＜20％(12月齡～36月齡)、或＜15％(37月齡～60月齡)、或CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜200／mm³(5歲～l4歲)；

b)       HIV感染和伴有至少一種兒童AIDS指征性疾病(參見附錄A.7.3 )。

7　HIV/AIDS的臨床分期

7.1　成人及15歲(含15歲)以上青少年

7.1.1　I期（HIV感染早期）

HIV感染者，符合下列一項即可診斷：

a)       3個月～6個月內(nèi)有流行病學(xué)史和/或有急性HIV感染綜合征和/或有PGL；

b)       抗體篩查試驗無反應(yīng)，兩次核酸檢測均為陽性；

c)       一年內(nèi)出現(xiàn)HIV血清陽轉(zhuǎn)。

7.1.2　II期（HIV感染中期）

HIV感染者，符合下列一項即可診斷：

a)      CD4+T淋巴細胞計數(shù)為200/mm³～500/mm³；

b)          無癥狀或有至少一項4.2.3.1的臨床表現(xiàn)；

c)      有至少一項4.2.4.1的臨床表現(xiàn)。

7.1.3　III期（AIDS期）

HIV感染者，符合下列一項即可診斷：

a)       CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜200/mm³；

b)       有至少一項4.2.5.1的臨床表現(xiàn)。

7.1.4　成人及青少年臨床分期的主要條件，見表1。

表1　成人及15歲(含15歲)以上青少年HIV／AIDS的臨床分期及其分期標(biāo)準(zhǔn)¹

7.2　15歲以下兒童

7.2.1　I期（HIV感染早期）

HIV感染者，符合下列一項即可診斷：

a)       CD4+T淋巴細胞百分比＞35％(＜12月齡)，＞30％(12月齡～36月齡)，＞25％(37月齡～60月齡)，CD4+T淋巴細胞計數(shù)≥500個／mm³(≥5歲)；

b)       有PGL或無癥狀。

7.2.2　II期（HIV感染中期）

HIV感染者，符合下列一項即可診斷：

a)       CD4+T淋巴細胞百分比在25％～35％(＜12月齡)，20％～30％(12月齡～36月齡)，15％～25％(37月齡～60月齡)，CD4+T淋巴細胞計數(shù)在200個／mm³～499個／mm³(≥5歲)；

b)       有至少一項4.2.3.2的臨床表現(xiàn)；

c)       有至少一項4.2.4.2的臨床表現(xiàn)。。

7.2.3　III期（AIDS期）

HIV感染者，符合下列一項即可診斷：

a)       CD4＜25％(＜12月齡)，＜20％(12月齡～36月齡)，＜15％(37月齡～60月齡)，＜200個／mm³(≥5歲)；

b)       有至少一項4.2.5.2的臨床表現(xiàn)。

7.2.4　兒童臨床分期的主要條件，見表2。

表2　15歲以下兒童HIV／AIDS的臨床分期及其分期標(biāo)準(zhǔn)¹

A 

A          

附　錄　A  
（資料性附錄）
HIV感染的臨床表現(xiàn)

A.1　急性HIV感染綜合征　acute HIV infection syndrome

初次感染HIV 1個月內(nèi)出現(xiàn)的發(fā)熱、咽痛、皮疹、肌肉關(guān)節(jié)痛、淋巴結(jié)腫大、頭痛、腹瀉、惡心、嘔吐等的一組臨床表現(xiàn)。

A.2　持續(xù)性全身性淋巴腺病　persistent generalized lymphoadenopthy

HIV感染者無其他原因的腹股溝以外兩處或兩處以上的淋巴結(jié)腫大，直徑大于l cm，持續(xù)3個月以上。

A.3　HIV消耗綜合征　HIV wasting syndrome

HIV感染者或AIDS患者在半年內(nèi)出現(xiàn)體重減少超過l0％，伴有持續(xù)發(fā)熱超過1個月，或者持續(xù)腹瀉超過1個月(1 d最少兩次)、食欲差、體虛無力等癥狀和體征。

A.4　HIV相關(guān)神經(jīng)認知障礙　HIV associated neurocognitive disorders

由感染HIV所引起的感知和運動神經(jīng)元的異常．影響日常工作，表現(xiàn)為健忘、注意力難以集中、思維緩慢、抑郁、細微運動功能損害等。

A.5　兒童HIV相關(guān)神經(jīng)認知障礙  infant HIV associated neurocognitivedisorders

感染HIV的兒童出現(xiàn)無其他原因的以下癥狀之一：大腦發(fā)育障礙或萎縮、智力障礙、對稱性運動障礙、輕癱、共濟失調(diào)或步態(tài)紊亂。

A.6　成人及15歲（含15歲）以上青少年的臨床表現(xiàn)分為A組、B組和C組。

A.6.1　A組臨床表現(xiàn)

該組臨床表現(xiàn)在免疫系統(tǒng)輕度缺陷時出現(xiàn)，包括如下任一項：

a)       不明原因體重減輕，不超過原體重10％；

b)      反復(fù)發(fā)作的上呼吸道感染，近6個月內(nèi)≥2次；

c)      帶狀皰疹；

d)      口角炎、唇炎；

e)      反復(fù)發(fā)作的口腔潰瘍，近6個月內(nèi)≥2次；

f)      結(jié)節(jié)性癢疹；

g)      脂溢性皮炎；

h)      甲癬。

A.6.2　B組臨床表現(xiàn)

該組臨床表現(xiàn)在免疫系統(tǒng)中度缺陷時出現(xiàn)，包括如下任一項：

a)       不明原因體重減輕，超過原體重l0％；

b)       不明原因的腹瀉，持續(xù)超過l個月；

c)       不明原因的發(fā)熱，間歇性或持續(xù)性超過1個月；

d)       持續(xù)性口腔念珠菌感染；

e)       口腔黏膜毛狀白斑；

f)       肺結(jié)核病(現(xiàn)癥的)；

g)       嚴(yán)重的細菌感染(如肺炎、體腔或內(nèi)臟膿腫、膿性肌炎、骨和關(guān)節(jié)感染、腦膜炎、菌血癥)；

h)       急性壞死性潰瘍性牙齦炎、牙周炎或口腔炎；

i)       不明原因的貧血(血紅蛋白＜80 g/L)和中性粒細胞減少(中性粒細胞數(shù)＜0.5×10⁹/L)或血小板減少(血小板數(shù)＜50×10⁹/L)，時間持續(xù)超過1個月。

A.6.3　C組臨床表現(xiàn)

該組臨床表現(xiàn)在免疫系統(tǒng)重度缺陷時出現(xiàn)，為AIDS指征性疾病，包括如下任一項：

a)       HIV消耗綜合征；

b)       肺孢子菌肺炎；

c)       食管念珠菌感染；

d)       播散性真菌病(球孢子菌病或組織胞漿菌病)；

e)       反復(fù)發(fā)生的細菌性肺炎，近6個月內(nèi)≥2次；

f)       慢性單純皰疹病毒感染(口唇、生殖器或肛門直腸)超過l個月；

g)       任何的內(nèi)臟器官單純皰疹病毒感染；

h)       巨細胞病毒感染性疾病(除肝、脾、淋巴結(jié)以外)；

i)       肺外結(jié)核?。?/span>

j)       播散性非結(jié)核分枝桿菌??；

k)       反復(fù)發(fā)生的非傷寒沙門菌敗血癥；

l)       慢性隱孢子蟲病(伴腹瀉，持續(xù)＞1個月)；

m)       慢性等孢球蟲??；

n)       非典型性播散性利什曼??；

o)       卡波西肉瘤；

p)       腦或B細胞非霍奇金淋巴瘤；

q)       浸潤性宮頸癌；

r)       弓形蟲腦??；

s)       馬爾尼菲青霉??；

t)       肺外隱球菌病，包括隱球菌腦膜炎；

u)       進行性多灶性腦白質(zhì)??；

v)       HIV相關(guān)神經(jīng)認知障礙；

w)       有癥狀的HIV相關(guān)性心肌病或腎病。

A.7　15歲以下兒童的臨床表現(xiàn)分為D組、E組和F組。

A.7.1　D組臨床表現(xiàn)

該組臨床表現(xiàn)在免疫系統(tǒng)輕度缺陷時出現(xiàn)，包括如下任一項：

a)       不明原因的肝脾腫大；

b)       結(jié)節(jié)性癢疹；

c)       反復(fù)發(fā)作或持續(xù)性上呼吸道感染；

d)       帶狀皰疹；

e)       廣泛的疣病毒感染；

f)       廣泛的傳染性軟疣感染；

g)       線形齒齦紅斑；

h)       口角炎、唇炎；

i)       反復(fù)發(fā)作的口腔潰瘍；

j)       不明原因的持續(xù)性腮腺腫大；

k)       甲癬。

A.7.2　E組臨床表現(xiàn)

該組臨床表現(xiàn)在免疫系統(tǒng)中度缺陷時出現(xiàn)，包括如下任一項：

a)      不明原因的中度營養(yǎng)不良；

b)      不明原因的持續(xù)性腹瀉；

c)      不明原因的發(fā)熱(＞37.5 ℃)，反復(fù)或持續(xù)l個月以上；

d)      口咽部念珠菌感染(出生6周～8周內(nèi)除外)；

e)      口腔黏膜毛狀白斑；

f)      急性壞死性潰瘍性牙齦炎、牙周炎或口腔炎；

g)      淋巴結(jié)結(jié)核；

h)      肺結(jié)核??；

i)      反復(fù)發(fā)作的嚴(yán)重細菌性肺炎；

j)      有癥狀的淋巴性間質(zhì)性肺炎；

k)      慢性HIV相關(guān)性肺病，包括支氣管擴張；

l)      不明原因的貧血(血紅蛋白＜80 g/L)和中性粒細胞減少(中性粒細胞數(shù)＜0.5×10⁹/L)和(或)慢性血小板減少(血小板數(shù)＜50×10⁹/L)。

A.7.3　F組臨床表現(xiàn)

該組臨床表現(xiàn)在免疫系統(tǒng)重度缺陷時出現(xiàn)，為AIDS指征性疾病，包括如下任一項：

a)       不明原因的嚴(yán)重消瘦，發(fā)育或營養(yǎng)不良；

b)       肺孢子菌肺炎；

c)       食管、氣管、支氣管或肺念珠菌感染；

d)       播散性真菌病(組織胞漿菌病或球孢子菌病)；

e)       反復(fù)發(fā)作的嚴(yán)重細菌性感染，如腦膜炎、骨或關(guān)節(jié)感染、體腔或內(nèi)臟器官膿腫、膿性肌炎(肺炎除外)；

f)       肺外結(jié)核?。?/span>

g)       播散性非結(jié)核分枝桿菌感染；

h)       慢性單純皰疹病毒感染(口唇或皮膚)，持續(xù)1個月以上；

i)       任何的內(nèi)臟器官單純皰疹病毒感染；

j)       巨細胞病毒感染，包括視網(wǎng)膜炎及其他器官的感染(新生兒期除外)；

k)       慢性隱孢子蟲病(伴腹瀉)；

l)       慢性等孢子蟲?。?/span>

m)       有癥狀的HIV相關(guān)性心肌病或腎??；

n)       卡波西肉瘤；

o)       腦或B細胞非霍奇金淋巴瘤；

p)       弓形蟲腦病(新生兒期除外)；

q)       馬爾尼菲青霉病；

r)       肺外隱球菌病，包括隱球菌腦膜炎；

s)       進行性多灶性腦白質(zhì)病；

i)      HIV相關(guān)神經(jīng)認知障礙。

A.8　本標(biāo)準(zhǔn)的HIV/AIDS 臨床分期與WHO臨床分期的對應(yīng)表（表A.1）

表A.1 本標(biāo)準(zhǔn)HIV/AIDS臨床分期與WHO臨床分期對應(yīng)表

附　錄　B
（規(guī)范性附錄）
HIV實驗室檢測技術(shù)

B.1　HIV-1/2抗體檢測

B.1.1　HIV抗體篩查試驗

B.1.1.1　試劑

應(yīng)根據(jù)檢測目的選用試劑，包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附試劑(ELISA)、化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試劑、免疫凝集試劑、免疫層析試劑、免疫滲濾試劑和抗原抗體聯(lián)合檢測試劑。應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。

B.1.1.2　篩查試驗

B.1.1.2.1　操作要求：試驗開始前將試劑和樣品置室溫(18 ℃～25 ℃)平衡，按SOP要求準(zhǔn)備試劑、待檢樣品和外部對照質(zhì)控血清。須嚴(yán)格按照試劑盒說明書以及質(zhì)量控制和安全防護要求操作。

B.1.1.2.2　結(jié)果處理：HIV抗體篩查試驗無反應(yīng)，由實施檢測的實驗室出具“HIV抗體陰性”報告。篩查試驗有反應(yīng)，不能向受檢者出具HIV抗體陽性報告，進入HIV抗體復(fù)檢試驗。復(fù)檢兩次試驗抗體均無反應(yīng)，出具“HIV抗體陰性”報告；復(fù)檢試驗有反應(yīng)（均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)），報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報告，進一步做補充試驗。

B.1.2　HIV抗體確證試驗

B.1.2.1　抗體確證試驗試劑。應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。

B.1.2.2　確證試驗。包括免疫印跡法(WB)，條帶/線性免疫試驗（RIBA/LIA），間接免疫熒光(IFA)和快速確證等方法。

B.1.2.2.1　抗體確證試驗

復(fù)檢試驗有反應(yīng)樣品，進行抗體確證試驗。出現(xiàn)HIV-2型特異性條帶者，可進一步做HIV-2抗體確證試驗。

B.1.2.2.2　抗體確證試驗結(jié)果處理如下：

j)       符合HIV-1抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV-1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。符合HIV-2抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV-2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。

k)       符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進一步做HIV核酸檢測，或2～4周后隨訪盡早明確診斷。

l)       符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)建議盡早做核酸檢測或“2～4周后復(fù)檢”。

B.1.3　質(zhì)量控制

B.1.3.1　應(yīng)制定實驗室質(zhì)量保證和質(zhì)量控制計劃。

B.1.3.2　應(yīng)建立實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制制度。

B.1.3.3　應(yīng)定期參加實驗室檢測能力驗證。

B.2　HIV病毒分離

B.2.1　樣本要求

首選新鮮抗凝全血，也可以使用血漿、精液及其他體液。

B.2.2　試劑

淋巴細胞分離液、細胞培養(yǎng)液（RPMI 1640）、胎牛血清、白細胞介素-2（IL-2）、植物血凝素（PHA）、HIV-1 p24抗原檢測試劑或逆轉(zhuǎn)錄酶檢測試劑。

B.2.3　病毒分離方法

外周血單核細胞(PBMC)共培養(yǎng)法。

B.2.4　分離結(jié)果判定

B.2.4.1　培養(yǎng)上清液p24抗原或逆轉(zhuǎn)錄酶連續(xù)2次呈陽性反應(yīng)、并有p24抗原含量/逆轉(zhuǎn)錄酶活性升高，或同時出現(xiàn)HIV特征性細胞病變，并經(jīng)鑒定為HIV 基因序列，判為HIV-1分離陽性。

B.2.4.2　培養(yǎng)上清液p24抗原或逆轉(zhuǎn)錄酶始終為陰性，判為HIV-1分離陰性。

B.2.4.3　HIV-1分離培養(yǎng)陽性可以確證為HIV-1感染，分離培養(yǎng)陰性不能排除HIV-1感染。

B.2.5　質(zhì)量控制

必須在生物安全三級實驗室的生物安全柜內(nèi)操作。每批實驗需設(shè)立正常供體PBMC單獨培養(yǎng)作為陰性對照，培養(yǎng)過程與檢測方法與實驗樣本完全一致。陰性對照p24抗原檢測為陰性，整個實驗數(shù)據(jù)才有效。

B.3　HIV核酸檢測

B.3.1　樣本采集、送檢和保存

B.3.1.1　使用以乙二胺四乙酸（EDTA）為抗凝劑的真空采血管，按常規(guī)采取全血并在6 h內(nèi)分離血漿。應(yīng)避免溶血和高脂樣本。

B.3.1.2　用于核酸檢測的血漿和血細胞樣品4天內(nèi)進行檢測的可存放于4 ℃，3個月以內(nèi)應(yīng)存放于-20℃以下。3個月以上應(yīng)置于-70 ℃以下保存，避免反復(fù)凍融。

B.3.2　核酸檢測

B.3.2.1　方法

HIV核酸檢測分為定性和定量試驗，均可作為HIV感染診斷試驗。HIV核酸定量檢測主要基于靶核酸擴增和信號放大兩種方法，HIV核酸定性檢測主要是實時定量PCR。

B.3.2.2　試劑

HIV-1核酸檢測應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)的試劑，并嚴(yán)格按說明書操作。

B.3.3　檢測結(jié)果分析和報告

B.3.3.1　核酸定性試驗

檢測結(jié)果有反應(yīng)報告本次實驗核酸陽性，檢測結(jié)果無反應(yīng)報告本次實驗核酸陰性。

B.3.3.2　核酸定量試驗

應(yīng)該嚴(yán)格按照實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序或者商品試劑盒說明書的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)進行結(jié)果判定。當(dāng)樣本檢測值小于試劑盒所規(guī)定線性范圍下限時，報告低于檢測限；當(dāng)檢測值大于5 000 CPs/mL(或IUs/mL)時，報告檢測值；當(dāng)樣本檢測值小于等于5 000CPs/mL(或IUs/mL)，需盡早再次采樣、檢測，如檢測結(jié)果大于5 000 CPs/mL(或IUs/mL)，報告檢測值；當(dāng)樣本檢測值小于等于5 000 CPs/mL(或IUs/mL)，報告檢測值，結(jié)合臨床及流行病史、CD4+T淋巴細胞檢測值或者HIV-1抗體隨訪檢測結(jié)果等進行診斷。

B.3.4　質(zhì)量控制和評價

B.3.4.1　應(yīng)制訂本實驗室質(zhì)量保證計劃。

B.3.4.2　應(yīng)建立本實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制制度。

B.3.4.3　應(yīng)定期參加實驗室間檢測能力驗證。

B.4　CD4+T淋巴細胞檢測

B.4.1　樣品檢測

B.4.1.1　雙平臺法：用EDTA抗凝，樣品應(yīng)在30 h以內(nèi)，最好8 h以內(nèi)處理；用酸性枸櫞酸鈉葡萄糖(ACD)或肝素抗凝，樣品應(yīng)在48 h以內(nèi)處理，最好8 h以內(nèi)處理。

B.4.1.2　單平臺法：用EDTA抗凝，CD45設(shè)門，樣品應(yīng)在72 h以內(nèi)處理；CD3設(shè)門，樣品應(yīng)在48h以內(nèi)處理。

B.4.1.3　不可檢測溶血、結(jié)冰和凝血的樣品。

B.4.2　檢測方法

B.4.2.1　可采用自動檢測方法和手工操作法：自動檢測方法包括流式細胞儀(雙平臺法和單平臺法) 和專門的細胞計數(shù)儀；手工操作法需要顯微鏡。

B.4.2.2　雙平臺法：需要用專門的細胞計數(shù)儀和流式細胞儀共同完成。

B.4.2.3　單平臺法：用流式細胞儀，主要以微球計數(shù)方法和體積計數(shù)方法為主。

B.4.3　結(jié)果報告

B.4.3.1　報告中CD4+T淋巴細胞應(yīng)為CD3+CD4+或CD3+CD45+CD4+陽性細胞。

B.4.3.2　CD4+T淋巴細胞百分比是指CD4+T淋巴細胞占總淋巴細胞的百分比。

B.4.3.3　應(yīng)按照實驗結(jié)果填寫CD4+T淋巴細胞的絕對數(shù)和百分比。

B.4.3.4　報告中應(yīng)有相關(guān)數(shù)據(jù)的正常值范圍(如CD4+T淋巴細胞百分比和絕對數(shù)范圍)。

B.4.3.5　報告單須經(jīng)檢驗人、審核人復(fù)核簽字，加蓋檢驗專用公章后發(fā)出，并做好保密工作。

B.4.4　質(zhì)量控制

B.4.4.1　應(yīng)制訂CD4+T淋巴細胞檢測質(zhì)量保證計劃。

B.4.4.2　應(yīng)建立內(nèi)部質(zhì)量控制制度。

B.4.4.3　應(yīng)定期參加淋巴細胞免疫表型檢測能力驗證。

參考文獻

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