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2011 年第 39 題 生物化學 A 型題 作為克隆載體的最基本條件是 A.DNA 分子量較小 B. 環(huán)狀雙鏈 DNA 分子 C. 有自我復制功能 D. 有一定遺傳標志 題目解析 克隆載體是指為攜帶目的基因、實現(xiàn)外源基因的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一類特殊 DNA 分子。 可充當基因載體的 DNA 分子有質粒 DNA、噬菌體 DNA 和病毒 DNA，他們經(jīng)適當改造后仍具有自我復制能力，或兼有表達外源基因的能力。 外源 DNA 片段離開染色體是不能復制的，因此所選擇的克隆載體必須具有自我復制功能，這是作為克隆載體的最基本條件，因此 C 選項正確。具體克隆載體應具有的其他特點我們在下面會詳細講解。 本題可參考《生物化學與分子生物學》人衛(wèi) 8 版教材 P423。 本題答案 C 考點講解 【2017 年大綱 生物化學（三）基因信息的傳遞 13. 基因重組的概念、基本過程及其在醫(yī)學中的應用】 本題的音頻講解請點擊這里哦
一、基因重組的概念 基因重組是指不同 DNA 分子斷裂和連接而產(chǎn)生 DNA 片段的交換并重新組合形成新 DNA 分子的過程。 二、重組 DNA 技術的基本過程 重組 DNA 技術又稱分子克隆、DNA 克隆或基因工程技術，主要過程是在體外將目的 DNA 片段與能自主復制的遺傳元件（載體）連接，形成重組 DNA 分子，進而在受體細胞中復制、擴增，從而獲得單一 DNA 分子的大量拷貝。 1. 重組 DNA 技術常用工具酶 限制性核酸內切酶（RE）是指能識別 DNA 特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈 DNA 的一類內切酶，RE 分為三類，重組 DNA 技術中常用的工具酶是 Ⅱ 類限制性核酸內切酶。大部分 Ⅱ 類酶識別 DNA 位點的核苷酸序列呈二元旋轉對稱，這種特殊的結構序列為回文結構。 注：RE 只能在準確的位置切割 DNA，并沒有連接酶活性，不能連接 DNA 片段。連接 DNA 片段由 DNA 連接酶完成。 2. 重組 DNA 技術常用載體 載體是為攜帶目的外源 DNA 片段，實現(xiàn)外源 DNA 在受體細胞中的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些 DNA 分子。 （1）克隆載體 包括質粒、噬菌體 DNA 和其他克隆載體。 特點： ① 至少有一個復制起始點使載體能在宿主細胞中自我復制； ② 至少有一個選擇標志（區(qū)分含與不含載體的細胞）； ③ 有適宜的 RE 的單一切點。 （2）表達載體 包括原核表達載體和真核表達載體。 注：克隆載體用于外源 DNA 片段的克隆和在受體細胞中的擴增；表達載體則用于外源基因的表達。 3. 重組 DNA 技術的基本過程（分-選-接-轉-篩-表達） （1）分——目的基因的分離獲取 ① 化學合成法； ② 從基因組 DNA 文庫和 cDNA 文庫中獲取目的 DNA； ③ PCR 法。 （2）選——載體的選擇與構建 ① 克隆載體：獲得目的 DNA 片段。 ② 表達載體：獲得目的 DNA 片段所編碼的蛋白質。 （3）接——目的 DNA 與載體連接 ① 黏端連接：依靠酶切后殘余的黏性末端進行連接，反應效率較高，方向性和準確性較強。 ② 平端連接：目的 DNA 兩端和線性化載體兩端均為平端，二者之間可在 DNA 連接酶作用下進行連接。 ③ 黏-平末端連接：目的 DNA 和載體之間通過一端為黏端，另一端為平端的方式進行連接。 （4）轉——重組 DNA 轉入受體細胞 ① 轉化：常常將重組質粒轉化進入大腸桿菌進行擴增。 ② 轉染：將外源 DNA 直接導入真核細胞（除酵母外）的過程。 ③ 感染：以噬菌體載體或黏粒載體構建的重組 DNA 分子，可通過包裝形成病毒顆粒，然后以感染的方式將重組 DNA 轉入受體菌。 （5）篩——重組體的篩選與鑒定 ① 借助載體上的遺傳標志進行篩選。 ② 序列特異性篩選：RE 酶切法、PCR 法、核酸雜交法、DNA 測序法。 ③ 親和篩選法：抗原-抗體反應或配體-受體反應。 （6）克隆基因的表達 三、基因重組在醫(yī)學中的應用 1. 生物制藥，如基因工程藥物等。 2. 轉基因和基因打靶，從而獲得轉基因動物和基因敲除/敲入動物，這些動物可用于制備人類疾病的動物模型進行研究。 思考題 目前基因治療主要采用的方法是什么？ |
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