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如何抓出“艾滋病病毒” 作者：周宗（上海中冶醫(yī)院） 審核：吳洪巧 (山東大學附屬濟南市中心醫(yī)院) SIFIC官微科普團隊微生物及檢驗小組 今年12月1日是第29個世界艾滋病日。截至2015年底，中國發(fā)現(xiàn)現(xiàn)存活的艾滋病病毒感染者共計57.7萬人，經測算估計全國人群總感染率0.06%，即每1萬人中有6人“染艾”，仍有32.1%感染者未被發(fā)現(xiàn)。 艾滋病患者早期無異常癥狀，常常被人們所忽略。往往發(fā)現(xiàn)癥狀的時候，艾滋病就已經到了晚期，治療已經極為不容易。所以，在感染早期及時的進行艾滋病檢測，是一項很重要的工作。 那么如何發(fā)現(xiàn)艾滋病感染者，艾滋病的檢測方法有哪些呢？ 艾滋病診斷 一、急性期 診斷標準：病人近期內有流行病學史和臨床表現(xiàn)，結合實驗室HIV抗體由陰性轉為陽性即可診斷，或僅實驗室檢查HIV抗體由陰性轉為陽性即可診斷。 80%左右HIV感染者感染后6周初篩試驗可檢出抗體，幾乎100%感染者12周后可檢出抗體，只有極少數(shù)患者在感染后3個月內或6個月后才檢出。 急性期通常發(fā)生在初次0?部分感染者出現(xiàn)HIV病毒血癥和免疫系統(tǒng)急性損傷所產生的臨床癥狀。大多數(shù)患者臨床癥狀輕微，持續(xù)1～3周后緩解。臨床表現(xiàn)以發(fā)熱最為常見，可伴有咽痛、盜汗、惡心、嘔吐、腹瀉、皮疹、關節(jié)疼痛、淋巴結腫大及神經系統(tǒng)癥狀。 二、無癥狀期 診斷標準：有流行病學史，結合HIV抗體陽性即可診斷，或僅實驗室檢查HIV抗體陽性即可診斷。 可從急性期進入無癥狀期，或無明顯的急性期癥狀而直接進入此期。此期持續(xù)時間一般為6～8年。其時間長短與感染病毒的數(shù)量和型別、感染途徑、機體免疫狀況的個體差異、營養(yǎng)條件及生活習慣等因素有關。 三、艾滋病期 診斷標準：有流行病學史、實驗室檢查HIV抗體陽性，加下述各項中的任何一項，即可診斷?1?，即可診斷為艾滋病?；蛘逪IV抗體陽性，而CD4＋T淋巴細胞數(shù) ?。?）原因不明的持續(xù)不規(guī)則發(fā)熱38℃以上，>1個月； （2）慢性腹瀉次數(shù)多于3次/日，>1個月； ?。?）6個月之內體重下降10%以上； ?。?）反復發(fā)作的口腔白念珠菌感染； （5）反復發(fā)作的單純皰疹病毒感染或帶狀皰疹病毒感染； ?。?）肺孢子菌肺炎（PCP）； （7）反復發(fā)生的細菌性肺炎； （8）活動性結核或非結核分枝桿菌??； ?。?）深部真菌感染； ?。?0）中樞神經系統(tǒng)占位性病變； ?。?1）中青年人出現(xiàn)癡呆； ?。?2）活動性巨細胞病毒感染； ?。?3）弓形蟲腦病； ?。?4）青霉菌感染； （15）反復發(fā)生的敗血癥； ?。?6）皮膚黏膜或內臟的卡波濟肉瘤、淋巴瘤。  機體免疫功能檢查 主要是中度以上細胞免疫缺陷包括：CD4+T淋巴細胞耗竭，外周血淋巴細胞顯著減少，CD4 艾滋病檢測 一、檢測時間 艾滋病檢測的最佳檢測時間，不良性行為等高危行為后，一般需要2-4周時間就可以檢測出艾滋病HIV抗體。時間越往后，檢測的準確性就越高，絕大多數(shù)被HIV感染的人，在4周后就能產生足夠多的抗體，這個數(shù)量能夠滿足使用目前的HIV抗體測試方法檢測出HIV陽性。如果不良性行為后3個月查的是陰性，6個月后再查，6個月的結果也是陰性就可以排除您是艾治病了。 二、檢測方法 1、抗體檢測 主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光試驗（IFA）。ELISA用去污劑裂解HIV或感染細胞液提取物作抗原，IFA用感染細胞涂片作抗原進行抗體檢測，如果發(fā)現(xiàn)陽性標本應重復一次。為防止假陽性，可做Westernblot（WB，蛋白印跡法）進一步確證。 WB法是用聚丙烯酰胺凝膠電泳將HIV蛋白進行分離，再經傳移電泳將不同蛋白條帶轉移于硝酸纖維膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶標抗體染色，就能測出針對不同結構蛋白抗體，如抗gp120、gp41、P24抗體，特異性較高。 快速檢測法，也稱為金標法，也是抗體檢測的一種方法，根據(jù)免疫層析法的原理，用于HIV抗體檢測的定性檢測。 抗體通常是在感染后3～8周能夠被檢測出來。目前，大多應用雙抗原夾心法，這種方法具有很好的靈敏性和特異性?？贵w檢測由初篩和確認試驗組成，初篩試驗呈陽性的必須進行確認試驗。酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法有一定的靈敏度，且操作簡單、快速，適合對大量樣品的檢測。因此，是目前臨床通用的初篩檢測方法。 國際上有3種確認試驗方法，包括免疫印跡試驗、條帶免疫試驗及免疫熒光試驗，目前以免疫印跡試驗最為常用。  2、抗體抗原檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗 ELISA法的基本原理是免疫反應物通過化學或免疫學的方法形成酶結合物，酶結合物能與待檢樣品中相應的抗原或抗體結合成為免疫復合物,然后加入酶底物,經酶的催化或水解作用,無色底物產生顏色,用肉眼、分光光度計觀察結果。 免疫印跡試驗 免疫印跡試驗主要用于確認試驗，基本原理是HIV全病毒抗原經過SDS?PAGE電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開來,然后再把這些已經分離的不同蛋白帶電轉移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100,再把它直接加到硝酸纖維素膜上,恒溫震蕩,使其充分接觸反應,血清中若含有抗HIV抗體,就會與膜條上的抗原帶相結合。加入抗人IgG酶結合物和底物后,即可使有反應的抗原抗體結合帶呈現(xiàn)紫褐色,根據(jù)出現(xiàn)條帶情況判定結果。有報告說，免疫印跡試驗的特異性不是很好, 有大約2%的假陽性率，但免疫印跡試驗依然是目前最常用的HIV確認試驗。 免疫熒光試驗(IFA) 基本原理為應用H?9或HUT78培養(yǎng)細胞作為載體,用HIV感染細胞,該細胞內就會含有HIV抗原,將HIV感染的淋巴細胞涂于玻片上,固定，制備為抗原片,加入待檢血清，待檢血清中的抗 HIV抗體與抗原結合后,再與熒光素標記的抗人Ig結合,在熒光顯微鏡下可見到細胞內有黃綠色熒光。 3、快速檢測 其特點是方便、快速（10分鐘出結果）、準確、是篩查艾滋病患者的首選方法。 一種是血檢試紙，一種是唾液試紙。唾液檢測試紙只有一種美國艾威爾的唾液檢測試紙，正規(guī)艾滋病檢測試紙生產批號均可以國家食品藥物監(jiān)督管理局查詢，目前也沒有出現(xiàn)過艾滋病試紙的假貨之類的情況出現(xiàn)。 膠體金法（金標）人類免疫缺陷病毒（HIV 1/2）抗體檢測試劑盒是應用膠體金免疫層析技術建立的靈敏、特異、操作簡便的一步法HIV 1/2抗體定性檢測試劑。用于定性檢測人血清或血漿樣本中的HIV 1型和HIV 2型的特異性抗體，以輔助診斷HIV感染，其陽性結果需用免疫印跡法確認。 結語 艾滋病不僅僅給社會，給家庭，都帶來沉重的經濟負擔和社會問題，要及早發(fā)現(xiàn)艾滋病，及早治療，杜絕將病毒再次傳給他人。 圖文編輯：小小牧童 審稿：高曉東 馬嘉睿 |
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