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辯證認(rèn)識(shí)免疫組化結(jié)果

 binho900 2016-11-07


  來(lái)源:網(wǎng)絡(luò)


  從免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果而知,免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關(guān)數(shù)據(jù)的提供。只有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作,專(zhuān)業(yè)化的結(jié)果分析才能得到準(zhǔn)確、科學(xué)的免疫組化結(jié)果,才能為病理診斷、治療預(yù)后提供有利的依據(jù)。
  隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),以往單靠H.E.染色診斷,難以作出明確的形態(tài)學(xué)判斷,而免疫組化尤其是在低分化或未分化腫瘤的鑒別診斷時(shí),準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%,因此免疫組化及其結(jié)果是診斷的關(guān)鍵。


  多方面分析免疫組化結(jié)果
  1、首先要確定免疫組化技術(shù)是否合格,合格的染色結(jié)果應(yīng)該是背景顏色淺淡或無(wú)著色,而陽(yáng)性標(biāo)志物清晰和定位明確。
  切片中的正常組織可以作為最簡(jiǎn)便的對(duì)照來(lái)判斷染色結(jié)果的可靠與否,例如用Vimentin抗體,間質(zhì)成纖維細(xì)胞利血管壁平滑肌細(xì)胞胞漿應(yīng)呈陽(yáng)性??隙殛?yáng)性的對(duì)照組織卻呈陰性,待測(cè)組織的染色結(jié)果也就不可靠;這現(xiàn)象常是由于抗體失效或過(guò)度稀釋、組織中抗原嚴(yán)重丟失等。
  2、不僅要判斷所檢組織中有或無(wú)陽(yáng)性標(biāo)記物,還要注意陽(yáng)性信號(hào)的分布部位和形態(tài)特征。
  一般說(shuō)來(lái),陽(yáng)性信號(hào)應(yīng)與被測(cè)抗原所在的部位一致,大部分細(xì)胞抗原位于胞質(zhì)內(nèi),其中亦有區(qū)別,有的陽(yáng)性顆粒彌散于整個(gè)細(xì)胞的胞質(zhì),有的則呈斑塊狀局限于胞漿某處。還有些抗原同時(shí)分布于胞質(zhì)和胞膜(如胃腸腺癌細(xì)胞的EMA),或核與胞質(zhì)(如S-100、HMB-45)。同一種抗原在不同類(lèi)型的細(xì)胞可定位不同,因而分布的特點(diǎn)也有一定的鑒別意義。


  標(biāo)志物陽(yáng)性程度的判斷
  一是依著色強(qiáng)度,二是依陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在同類(lèi)細(xì)胞中所占比例多少,二者亦可結(jié)合應(yīng)用。陽(yáng)性程度的分等一般是粗略的,如僅為診斷目的而非為研究作的免疫組化,判斷結(jié)果常以定性為主。
  著色程度不僅取決于抗原的含量和分布密度,還與抗體的敏感性、切片厚度、顯色時(shí)間等多種技術(shù)因素有關(guān)。但是在固定的技術(shù)條件下,比較染色反應(yīng)的強(qiáng)度對(duì)鑒別診斷仍有一定的參考意義,例如前述腺癌與間皮瘤均可呈Vimentin陽(yáng)性,但通常腺癌細(xì)胞弱陽(yáng)性或部分細(xì)胞陽(yáng)性,而間皮細(xì)胞常為明確的陽(yáng)性。


  辯證對(duì)待免疫組化染色結(jié)果與預(yù)期結(jié)果
  如果發(fā)現(xiàn)免疫組化染色結(jié)果與預(yù)期的不一致時(shí)需要具體分析,可能相關(guān)的原因有:
  1、腫瘤細(xì)胞和其相應(yīng)的正常細(xì)胞在抗原表達(dá)的質(zhì)和量方面都可有所不同;抗原的定位也可偏離一般規(guī)律,如正常細(xì)胞的膜型抗原在癌細(xì)胞卻可定位于胞質(zhì)內(nèi)。腫瘤細(xì)胞可出現(xiàn)異常的免疫表型,有時(shí)表達(dá)其它類(lèi)型細(xì)胞的抗原,例如偶爾可見(jiàn)惡性淋巴瘤細(xì)胞在T細(xì)胞性免疫標(biāo)志物陽(yáng)性的同時(shí)呈B細(xì)胞的標(biāo)志物SIg+。這些現(xiàn)象不少見(jiàn),使得對(duì)腫瘤免疫組化染色結(jié)果的解釋復(fù)雜化。為解決這問(wèn)題,可選用多種抗體以增加證實(shí)或否定的依據(jù),此外也要求病理醫(yī)生積累經(jīng)驗(yàn)和相關(guān)的知識(shí)。
  2、細(xì)胞內(nèi)的陽(yáng)性標(biāo)志物不一定是該細(xì)胞自身表達(dá)的抗原,而可能是吞噬或吞飲的抗原物質(zhì)。如間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞可攝入其他細(xì)胞釋放的抗原物質(zhì),因而常呈非特異性的陽(yáng)性表現(xiàn);惡性腫瘤細(xì)胞侵襲破壞相鄰的組織后也可攝入正常細(xì)胞的抗原,如惡性纖維組織細(xì)胞瘤、惡性黑色素瘤可與鄰近的正常上皮呈現(xiàn)相同的上皮細(xì)胞抗原;甲狀腺內(nèi)的轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞可以呈甲狀腺球蛋白陽(yáng)性反應(yīng),固而可能被誤認(rèn)為甲狀腺原發(fā)癌;但腫瘤細(xì)胞的吞噬只是近距離的,陽(yáng)性細(xì)胞位于殘存的正常組織附近。
  3、同一種抗原的多克隆抗體和單克隆抗體的反應(yīng)結(jié)果可能是不同的。一般說(shuō)來(lái)多克隆抗體的敏感性較高但特異性較差,而單克降抗體則相反。這是由于單克隆抗體對(duì)抗原決定簇的專(zhuān)一性強(qiáng);由不同克隆的雜交瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體,即使都作用于同一種抗原,但所結(jié)合的抗原決定簇不同,使用時(shí)可能出現(xiàn)不同的反應(yīng)結(jié)果:例如在福爾馬林固定的石蠟包埋組織中,部分抗原決定簇被掩蔽,就可能出現(xiàn)用A克隆的單抗結(jié)果為陽(yáng)性而用B克隆的單抗結(jié)果為陰性
  4、同一腫瘤中的瘤細(xì)胞是異質(zhì)性的,這也反映在免疫標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞在腫瘤內(nèi)的分布是不均勻的,甚至同一細(xì)胞巢中陰性和陽(yáng)性細(xì)胞并存。


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