雙指示劑甲醛滴定法

(一)原理：氨基酸具有酸、堿兩重性質(zhì)，因?yàn)榘被岷?COOH基顯示酸性，又含有-NH2基顯示堿性。由于這二個(gè)基的相互作用，使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時(shí)，-NH2與甲醛結(jié)合，其堿性消失，破壞內(nèi)鹽的存在，就可用堿來滴定-COOH基，以間接方法測(cè)定氨基酸的量。
（二）試劑

(1)20％中性甲醛溶液，(以百里酚酞為指示劑
，用0.1NNaOH溶液滴定呈淡藍(lán)色)。(2)0.1％百里酚酞95%乙醇溶液。(3)0.1％中性紅50％乙醇溶液。

(4)0.100N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。(三)操作步驟：
移取一定量(約含20毫克左右的氨基酸)樣品溶液2份,分別置于250毫升錐形瓶中,加水50毫升;其中一份加3滴中性紅指示劑，用0.1OONNaOH溶液滴定至琥珀色為終點(diǎn)。另一份加入中性甲醛10毫升及3滴百里酚酞指示劑，搖勻，靜置1分鐘，(此時(shí)藍(lán)色應(yīng)消失)。再用0.1OONNaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù)，用下述公式計(jì)算
計(jì)算：
氨基酸態(tài)氮(％)=（(V1-V2)×N×0.014）×100/W
式中：
N：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃渡。
V1：測(cè)定樣品消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(ml)。
V2:測(cè)定空白消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(ml)。
W：樣品溶液相當(dāng)樣品的質(zhì)量(克)。
0.014：氮的毫克當(dāng)量。

注意事項(xiàng)：
測(cè)定時(shí)樣品的顏色較深，應(yīng)加活性炭脫色之后再滴定。